Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Основные аспекты адаптации организмов к неблагоприятным условиям окружающей среды 9
1.2. Классификация и функции БТШ 11
1.3. Структура и эволюция генов ТШ 20
1.4. Экспрессия генов ТШ и ее регуляция 27
1.5. Участие БТШ в адаптации к экстремальным условиям 38
1.6. БТШ в медицине 42
Глава 2. Материалы и методы 46
2.1. Материалы 46
2.1.1. Геномная фаговая библиотека 46
2.1.2. Насекомые, условия обитания и теплового шока 46
2.1.3. Штаммы E. coli 46
2.1.4. Ферменты рестрикции 46
2.1.5. Зонды 47
2.1.6. Линии эукариотических клеток, условия культивирования и ТШ 47
2.2. Методы: 47
2.2.1. Скрининг геномной фаговой библиотеки 47
2.2.2. Выделение ДНК бактериофага 48
2.2.3. Расщепление ДНК рестрицирующими эндонуклеазами 48
2.2.4. Электрофорез ДНК 48
2.2.5. Построение рестриктных карт рекомбинантных фагов 49
2.2.6. Включение радиоактивной метки в ДНК 49
2.2.7. Перенос и гибридизация по Саузерну 49
2.2.8. ПЦР-анализ 50
2.2.9. Выделение фрагментов ДНК из геля 50
2.2.10. Клонирование фрагментов ДНК 51
2.2.11. Трансформация компетентных клеток 51
2.2.12. Выделение плазмидной ДНК 51
2.2.13. Секвенирование ДНК 52
2.2.14. Анализ последовательностей 52
2.2.15. Выделение фракции лимфоцитов из крови верблюда 52
2.2.16. Выделение тотальной РНК 52
2.2.17. 5 - и 3 -RACE анализ и ПЦР с обратной транскрипцией 53
2.2.18. Электрофорез РНК 53
2.2.19. Нозерн-гибридизация 53
2.2.20. Двумерный электрофорез белков по О Фарреллу 54
2.2.21. Диск-электрофорез белков с ДДС-Na (по Лэммли) и окрашивание гелей по Кумасси G-250 54
2.2.22. Идентификация белков методом пептидного фингерпринтинга 55
2.2.23. Экспрессия и очистка белка GAF 55
2.2.24. Получение белковых экстрактов 56
2.2.25. Анализ связывания факторов транскрипции с элементами теплового шока (EMSA) 56
2.2.26. Получение репортерных конструкций 56
2.2.27. Трансфекция плазмид и измерение интенсивности люминесценции 57
Глава 3. Результаты исследования 58
3.1. Клонирование и анализ структуры кластера генов hsp70A1 у верблюда Camelus dromedarius 58
3.2. Дифференциальный анализ экспрессии генов hsp1A, hspA1B и hspA1L 62
3.3. Клонирование и анализ структуры кластера генов hsp83 у S. singularior и O. pardalina 64
3.4. Сравнение последовательностей генов hsp83 и hsp70 у Stratiomys singularior и Stratiomys japonica 79
3.5. Анализ экспрессии генов hsp83 у S. singularior и O. pardalina 70
3.6. Сравнительный анализ структуры промоторных областей генов группы hspA1 верблюда и других видов млекопитающих 72
3.7. Сравнение активности промоторов hsp70 C. dromedarius и H. sapiens в культуре клеток HEK293 74
3.8. Сравнительный анализ структуры промоторных областей генов hsp70 и hsp83 S. singularior и O. pardalina 77
3.9. Сравнение активности промоторов hsp70 S. singularior и D. melanogaster в культуре клеток D. melanogaster Schneider2 81
3.10. Эффект вставки GAGA-сайтов в промотор гена hsp70S3 82
3.11. Сравнение активности промоторов hsp83 S. singularior и D. melanogaster в культуре клеток Schneider2 84
Глава 4. Обсуждение результатов 86
Выводы 90
Список литературы 91
