Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1 Сигнальные механизмы индукции синтеза ИФН 17
1.1.1 Рецепторы врождённого иммунитета TLRs, RLRs и NLRs 17
1.1.2 ДсРНК-зависимые пути активации генной транскрипции 24
1.1.3 Факторы транскрипции IRFs и NFkB 24
1.2 Сигнальные пути действия ИФН I, II и III типов .31
1.2.1 Рецепторы ИФН 31
1.2.2 Регуляция транскрипции генов гамма-ИФН 33
1.2.3 Активаторы транскрипции JAK-STATs 34
1.3. Гены и белки индуцированные ИФН и дсРНК .36
1.3.1 ДсРНК-зависимая протеинкиназа (дсПК - PKR) 38
1.3.2 Антивирусная система ферментов ОАS/RNasel .41
1.3.3 Белки ISG15, индуцированные ИФН 1.4 РНК-интерференция и фермент Dicer 45
1.5 Взаимосвязь системы ИФН с апоптозом 1.5.1 Рецепторный Fas-зависимый апоптоз 47
1.5.2 Митохондриальный Bcl-зависимый апоптоз 49
1.5.3 Сигнальные механизмы индукции апоптоза ИФН и дсРНК 51
1.5.4 Противоопухолевое действие ИФН и дсРНК 53
1.6 Резюме 58
ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1 Материалы
2.1.1 Рекомбинантные человеческие ИФН 59
2.1.2 Индукторы ИФН 59
2.1.3 Гриппозные вакцины 59 2.1.4 Вирусы 60
2.1.5 Клетки и клеточные культуры .60
2.1.6 Химические реактивы 62
2.1.7 Олигонуклеотидные ПЦР-праймеры 63
2.1.8 Лабораторное оборудование 63
2.2 Методы
2.2.1 Выделение РНК 64
2.2.2 Реакция обратной транскрипции (ОТ) 64
2.2.3 ПЦР - полуколичественный вариант 64
2.2.4 ПЦР в реальном времени (ОТ-ПЦР-РВ) 65
2.2.5 Расчёты уровней экспрессии генов 65
2.2.6 Иммуноферментный анализ (ИФА) 66
2.2.7 Титрование ИФН по противовирусной активности 66
2.2.8 Реакция нейтрализации активности ИФН 67
2.2.9 Размножение вирусов 67
2.2.10 Определение инфекционного титра вирусов по ЦПД .67
ГЛАВА 3. Результаты исследований
3.1 Конститутивные уровни экспрессии генов рецепторов врождённого иммунитета и активаторов транскрипции в клетках крови человека... 68
3.2 Стимуляция препаратами ИФН типа 1 экспрессии генов рецепторов врождённого иммунитета 69
3.3 Сравнение действия препаратов рекомбинантных ИФН типа 1 на экспрессию генов системы ИФН и апоптоза в нормальных и опухолевых клетках 70
3.4 Феномен супериндукции генов «домашнего хозяйства» в опухолевых клетках 77
3.5 Действие на вирусы рекомбинантного альфа2-ИФН 81
3.5.1 Вирус гриппа А H1N1 (Москва, 2009) 81
3.5.2 Вирус Карельской лихорадки (ВКЛ LEIV9298) 84 3.5.3 Активность генов ферментов системы ИФН в клетках обработанных Реафероном и заражённых ВКЛ .88
3.6. Стимуляция препаратами индукторами ИФН разной природы генов рецепторов врождённого иммунитета, системы ИФН и апоптоза
3.6.1 Ридостин (Рибонуклеат натрия) 90
3.6.2 Ридостин как иммуноадьювант гриппозных вакцин .94
3.6.3 Циклоферон 97
3.6.4 Иммуномакс 100
3.7. Индивидуальные реакции генов TLRs, RLRs и ИФН-генов на препараты 101
3.8.1 Кагоцел как индуктор генов системы ИФН и цитокинов у пациентов (сравнение с Ридостином ) .109
3.8.2 Кагоцел и Ридостин как регуляторы генов апоптоза 117
3.9 Нарушения экспрессии генов системы ИФН у больных бронхиальной астмой
4. Обсуждение результатов 120
5. Заключение 141
6. Выводы 143
7. Список используемой литературы
