Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1 Классификация, структура и функции Толл-подобных рецепторов 12
1.2 Сигнальные пути, ассоциированные с Толл-подобными рецепторами 21
1.3 Участие Toll-подобных рецепторов в формировании реакций врожденного и приобретенного иммунитета 26
1.4 Экспрессия Толл-подобных рецепторов различными типами клеток 27
1.5 Участие Толл-подобных рецепторов в формировании резистентности организма в отношении различных патогенов 36
1.6 Использование лигандов Толл-подобных рецепторов в медицинской практике 38
1.7 Заключение 40
ГЛАВА2. Материалы и методы 43
2.1 Материалы 43
2.1.1 Бактериальные штаммы 43
2.1.2 Лиганды Толл-подобных рецепторов 2,4,5 43
2.1.3 Лабораторные животные 43
2.1.4 Ферменты и другие реактивы 43
2.1.5 Лабораторное оборудование 44
2.2 Методы
2.2.1 Измерение интенсивности биолюминесценции в организме трансгенных мышей BALB/c в режиме реального времени 44
2.2.2 Определение интенсивности биолюминесценции в органах трансгенных мышей 45
2.2.3 Выделение тотальной РНК из мочевого пузыря мыши 45
2.2.4 Реакция обратной транскрипции 46
2.2.5. Получение гистологических срезов 46
2.2.6. Иммуногистохимическое окрашивание гистологических срезов 47
2.2.7 Окраска гистологических срезов гематоксилином и эозином 47
2.2.8 Постановка полимеразной цепной реакции 47
2.2.9. Определение экспрессии белков методом иммуноблотинга 49
2.2.10. Измерение концентрации цитокинов 50
2.2.11. Культивирование S. typhimurium 51
2.2.12. Модель инфекции S. typhimurium на лабораторных животных 51
2.2.13 Культивирование Е. coli 51
2.2.14 Модель урологической инфекции Е.соИ на лабораторных животных 51
2.2.15 Определение количества бактерий методом высева 52
ГЛАВА 3. Результаты исследований 52
3.1. Анализ способности лигандов Толл-подобных рецепторов 2,4,5
активировать транскрипционный фактор NF-kB in vivo 53
3.2 Анализ влияния дозы лигандов TLR на активацию NF-kB в мочевом пузыре. 3.3 Определение типа клеток в печени, в которых происходит активация NF kB в ответ на стимуляцию Толл-подобного рецептора 5 58
3.4 Полногеномный анализ изменения экспрессии генов в печени после введения лигандов Толл-подобных рецепторов 2,4,5 59
3.5 Определение влияния стимуляции Толл-подобных рецепторов на уровень секреции цитокинов в гомогенате печени 62
3.6 Определение влияния стимуляции Толл-подобных рецепторов на выживаемость мышей при инфекции S. typhimurium 67
3.7 Определение типа клеток в мочевом пузыре мыши, в котором происходит активация NF-kB в ответ на стимуляцию TLR 5 73
3.8 Определение типа клеток в мочевом пузыре макаки резус, в котором происходит активация NF-kB в ответ на стимуляцию TLR 5 76
3.9 Полногеномный анализ изменения экспрессии генов в мочевом пузыре мыши после введения лигандов Толл-подобных рецепторов 2,4,5 78
3.10 Полногеномный анализ изменения экспрессии генов в мочевом пузыре макаки резус после введения лигандов Толл-подобных рецепторов 2,4,5 81
3.11 Проверка данных полногеномного анализа транскриптома мыши 84
3.12 Изменение цитокинового/хемокинового статуса в мочевом пузыре мыши 87
3.13 Определение влияния лиганда Толл-подобного рецептора 5 на резистентность мышей к урологической инфекции 88
4. Обсуждение результатов 91
Выводы 105
Список используемой литературы
