Введение
ГЛАВА 1. Строение лигнина 8
ГЛАВА 2. Грибы - деструкторы лигнина 10
ГЛАВА 3. Энзимология разложения лигнина 11
3.1 Лигнин пероксидаза 11
3.1.1 Окисление различных субстратов лигнин пероксидазой 13
3.1.2 Участие вератрилового спирта в окислении субстратов 14
3.1.3 Лигнинолитические свойства лигнин пероксидазы 15
3.2 Мп-пероксидаза 15
3.2.1 Механизмы реакций, катализируемых Мп-пероксидазой 17
3.2.2 Реакции Мп-пероксидазы с участием радикалов 18
3.2.3 Разложение лигнина Мп-пероксидазой 19
3.3 Гибридная Мп-пероксидаза 20
3.4 Строение активных центров лигнинолитических пероксидаз 21
3.5 Условия продукции лигнинолитических пероксидаз 22
3.6 Разложение ксенобиотиков лигнинолитическими пероксидазами 24
3.7 Лакказа 25
ГЛАВА 4. Материалы и методы 27
4.1 Реактивы и материалы 27
4.2 Объект исследования и его культивирование 27
4.3 Очистка фермента 27
4.4 Электрофорез 28
4.5 Спектральные методы и получение интермедиатов каталитического цикла 28
4.6 Пиридингемохромовый метод и определение коэффициентов молярной экстинкции фермента .29
4.7 Проведение реакции с бензиловыми спиртами и модельным соединением лигнина в присутствии медиаторов 29
4.8 Идентификация продуктов реакции медиаторов с бензиловыми спиртами и модельным соединением лигнина 30
4.9 Методы определения активности ферментов 30
4.10 Аналитические методы 31
4.11 Определение концентрации белка 32
4.12 Инактивация фермента в присутствии ГБТ и ГБТО 32
4.13 Определение типа ингибирования фермента 32
4.14 Реакция гибридной Мп-пероксидазы с 2,4,6-ТХФ в присутствии ГБТ 32
ГЛАВА 5. Результаты исследований 33
5.1 Очистка гибридной Мп-пероксидазы 33
5.2 Спектральные свойства гибридной Мп-пероксидазы 33
5.3 Субстратная специфичность 38
5.4 Каталитический цикл гибридной Мп-пероксидазы 40
5.5 «Оксидазная» реакция гибридной Мп-пероксидазы 43
5.5.1 Окисление НАДН гибридной Мп-пероксидазой 43
5.5.2 Участие различных форм фермента в окислении НАДН 47
5.6 Окисление субстратов в присутствии медиаторов 50
5.7 Инактивация гибридной Мп-пероксидазы в присутствии медиаторов 57
Обсуждение результатов 64
Выводы 72
Список литературы 73
