Введение
1. Литературный обзор 9
1.1 Поверхностно-активные вещества, продуцируемые микроорганизмами 9
1.2. Трегалолипидные биосурфактанты бактерий-нефтедеструкторов рода Rhodococcus 13
1.2.1 Структурное разнообразие трегалолипидов, продуцируемых родококками 13
1.2.2 Физиологическая роль и биологическая активность трегалолипидов 16
1.2.3 Характеристика трегалолипидов как сурфактантов 24
1.2.4 Влияние субстратов на способность родококков продуцировать биосурфактанты 27
1.2.5 Адаптация бактерий рода Rhodococcus к пониженным температурам и продукция биосурфактантов в этих условиях 30
1.2.6 Биодеградация углеводродов нефти родококками при пониженых температурах 33
1.2.7 Применение трегалолипидных биосурфактантов, в том числе в биоремедиации загрязненных территорий 33
1.3 Методы изучения биосурфактантов 37
1.3.1 Скрининговые методы определения поверхностной и эмульгирующей активности 38
1.3.2 Выделение, характеристика и очистка трегалолипидных биосурфактантов 47
1.3.3 Определение структуры трегалолипидов 49
Заключение 52
2. Материалы и методы исследования 54
2.1. Объекты исследования и условия культивирования 54
2.2 Рост микроорганизмов и продуцирование биосурфактантов 55
2.3 Гидрофобность клеточной поверхности микроорганизмов 56
2.4 Трансмиссивная электронная микроскопия 57
2.5 Содержание общих липидов клеток бактерий 57
2.6. Клеточносвязанный гексадекан 58
2.7 Выделение внеклеточных биосурфактантов 58
2.8 Тонкослойная хроматография гликолипидов 58
2.9 Определение жирнокислотного состава липидов и биосурфактанта 59
2.10 Разделение трегалолипидов методом колоночной хроматографии 59
2.11 Определение структуры биосурфактантов методом масс-спектрометрии 60
2.12 Физико-химические свойства трегалолипидов 61
3. Результаты и их обсуждения 65
3.1 Рост бактерий R. erythropolis X5 и R. erythropolis S67 и их способность продуцировать биосурфактанты в зависимости от источника углерода 67
3.2. Влияние температуры на способность родококков продуцировать биосурфактанты 68
3.3 Адгезивная активность бактерий R.erythropolis X5 и R.erythropolis S67 74
3.4 Общее содержание и жирнокислотный состав липидов бактерий и внеклеточных липидов 77
3.4.1 Выделение и характеристика суммарных липидов бактерий 77
3.4.2 Содержание связанного гексадекана в биомассе бактерий и жирнокислотный состав клеточных липидов 81
3.4.3 Жирнокислотный состав внеклеточных липидов 85
3.5. Морфология и ультраструктурная организация клеток R. erythropolis X5 и R. erythropolis S67 при росте на гексадекане 88
3.5.1. Морфология R. erythropolis X5 и R. erythropolis S67 при росте на гексадекане 88
3.5.2. Ультраструктурная организация клеток R. erythropolis X5 и R. erythropolis S67 при росте на гексадекане 89
3.6 Выделение и характеристика гликолипидных биосурфактантов 93
3.6.1 Обнаружение гликолипидов в культуральной среде бактерий 93
3.6.2. Выделение и очистка гликолипидных биосурфактантов 94
3.5.2 Определение структуры трегалолипидов 97
3.7. Характеристика сукцинилтрегалолипидов как сурфактантов 104
3.7.1 Критическая концентрация мицеллообразования 104
3.7.2 Солюбилизация н-гексадекана под действием сукцинилтрегалолипидов 108
3.8 Биодеградация гексадекана бактериями R. erythropolis X5 и R. erythropolis S67 при участии биосурфактантов 109
Выводы 114
Список литературы 116
