Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1 Характеристика увеальной меланомы 11
1.1.1 Клиническая характеристика заболевания 11
1.1.2 Клинико-патологические особенности и их прогностическая значимость 13
1.2 Хромосомные нарушения и идентификация генов, вовлеченных в канцерогенез 18
1.2.1 Увеальная меланома и меланома кожи 19
1.2.2 Хромосомные перестройки в УМ 23
1.2.2.1 Потеря хромосомного материала в увеальных меланомах 25
1.2.2.2 Определение избыточного хромосомного материала в УМ 26
1.2.3 Идентификация генов, вовлеченных в канцерогенез 26
1.2.3.1 Анализ потери гетерозиготности в УМ 27
1.2.3.2 Поиск мутаций 31
1.2.3.3 Анализ метилирования в УМ 32
1.2.3.4 Изучение профиля экспрессии генов 37
1.3 Ассоциации молекулярных нарушений с клинико-патологическими факторами 39
1.4 Разработка ДНК-диагностических протоколов 43
1.4.1 Определение циркулирующих опухолевых клеток в общем кровотоке 43
1.4.2 Молекулярно-генетическое исследование операционного материала 44
1.4.3 Техника тонкоигольной аспирационной биопсии 45
Резюме 49
Глава 2. Материалы и методы 51
2.1 Клинический материал 51
2.2 Забор крови и операционного материала 51
2.3 Выделение геномной ДНК 51
2.4 Анализ аллельного дисбаланса 53
2.5 Аллель-специфическая амплификация мутантного аллеля BRAF 55
2.6 Анализ метилирования методом метил-чувствительной ПЦР 56
2.7 Электрофорез в ПААГ 57
2.8 Ультратонкое окрашивание нитратом серебра 58
2.9 Программное обеспечение 58
2.10 Статистическая обработка 59
Глава 3. Результаты и обсуждение 60
3.1 Спектр молекулярных нарушений в увеальных меланомах 61
3.1.1 Анализ потери гетерозиготности в УМ 61
3.1.2 Анализ метилирования в УМ 69
3.1.3 Поиск мутаций 71
3.1.4 Профиль молекулярной патологии в исследованных образцах УМ 72
3.2 Анализ ассоциаций молекулярно-генетических нарушений в увеальных меланомах с клинико-патологическими факторами и факторами прогноза 74
3.3 Спектр молекулярной патологии в УМ и меланоме кожи 77
3.4 Разработка системы ДНК-маркеров для диагностики увеальной меланомы 79
3.5 Диагностика молекулярных маркеров УМ в биоптатах 82
Заключение 86
Выводы 88
Практические рекомендации 89
Список литературы
