Введение
1. Обзор Литературы 5
1.1.Метилирование генома эукариот и растений 6
1.2. ДНК метилтрансферазы. Защита от de novo метилирования 8
1.3. X инактивация. Геномный импринтинг 13
1.4 Метилирование ДНК и заболевания 18
1.5 Модификации гистонов. Связь метилирования ДНК и модификаций гистонов 21
1.6 Метил-ДНК-связывающие белки 26
1.7 Краткая характеристика белков семейства BTB/POZ 33
2. Материалы и методы 43
2.1.3. Олигонуклеоитиды для клонирования полноразмерных Kaiso, ZBTB4, ZBTB38
и цинковых пальцев ZBTB4 и ZBTB38 для имуннофлуоресценции 44
2.1.4. Олигонуклеотиды для анализа результатов по иммунопреципитации хроматина
методом ПЦР 45
2.1.5. Олигонуклеотиды, использованные для РТ-ПЦР 45
2.1.6. Олигонуклеотиды для получения NLS Kaiso 45
2.2. Полноразмерные кДНК Kaiso, ZBTB4, ZBTB38 45
2.3. Полимеразиая цепная реакция 46
2.3. Трансформация E.coli и выделение плазмидной ДНК ...46
2.4. Получение компетентных клеток 47
2.5. Клонирование ПЦР-продукта 48
2.6. Получение радиоактивно меченых ДНК-зондов для экспериментов по торможению ДНК-белковых комплексов в геле 48
2.7. Исследование ДНК-белкового взаимодействия методом задержки подвижности в
геле ДНК-белкового комплекса 50
2.8.Иммунопреципитация хроматина 50
2.9. Нозерн блот гибридизация и количественный РТ-ПЦР 52
2.10. Клеточные линии и временная трансфекция 54
2.11. Метил-зависимый репрессивный тест 54
2.12. Иммунофлуоресценция и микроскопия 55
2.13. Клонирование цинковых пальцев Kaiso, ZBTB4, ZBTB38 для in vitro трансляции. 55
2.14. Клонирование полноразмерных Kaiso, ZBTB4, ZBTB38 и цинковых пальцев данных белков для иммунофлуоресценции 56
2.15. Клонирование делений ZBTB4 и ZBTB38 для метил-зависимого репрессионого теста 56
3. Результаты и обсуждение 59
3.1. Два новых белка ZBTB4 и ZBTB38, гомологичных Kaiso, узнают метилированую ДНК in vitro 59
3.2. ZBTB4 и ZBTB38 связывают метилированую ДНК in vivo 64
3.3 ZBTB4 и ZBTB38 являются метил-зависимыми репрессорами 70
3.4. Картина экспрессии ZBTB4 и ZBTB38 76
Заключение 77
Выводы 81
Благодарности 82
Список Литературы
