Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1 Молекулярио-генетические онкомаркеры и методы их определепия 9
1. 2. Иммунохимичсскис опухолевые маркеры и методы их определения 13
1, 3. Простата - специфический антиген 18
1, 4. Белковые микрочипы 23
1.4.1 Двумерные белковые микрочипы для анализа онкомаркеров 28
1.4.2 Белковые микрочипы на основе гидрогелей 31
ГЛАВА 2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 36
2.1. Белковые микрочипы , 36
2. 1.2. Регистрация сигналов с гелевых ячеек микрочипа 37
2.1.3. Подбор условий иммобилизации белков 38
2.1.4 Выбор состава геля на примере прямого анализа ПСА 44
2.1.5. Сравнение двумерных и трехмерных микрочииов 47
2.1.6. Определение констант ассоциации (Kass) бинарного комплекса флуоресцентно меченного ПСА с иммобилизованными па микрочипе мопоклональпыми антителами 49
2.2. Белковый гидрогелевый микрочип для количественного анализа двух форм ПСА 52
2.2.1. Характеристики количественного иммупоанализа ПСА на биочипах 54
2.2.2. Внутренняя калибровочная кривая 57
2.2.3. Определение значений «эффективных» концентраций для внутренней калибровочной кривой 59
2.2.4. Получение результатов иммупоанализа 60
2.2.5. Определение содержания двух форм ПСА в сыворотках крови 63
2.2,6, Стабильность микрочипов с иммобилизованными антителами и ПСА 64
ГЛАВА 3, ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 66
3.1. Приборы и реактивы 66
3.2. Изготовление белковых микрочипов 67
3.3. Окрашивание белков флуоресцентным красителем Су5 68
3.4. Флуоресцентные и хсмилюминесцептные измерения 69
3.5. Определение степени иммобилизации белков в геле 70
3.6. Определение ферментативной активности белков в растворе 70
3.7. Регистрация ферментативной активности белков па микрочипе 71
3.8. Определение процента сохранения ферментативной активности пероксидазы после иммобилизации на чипе 72
3.9. Прямой анализ пероксидазы на микрочипе с иммобилизованными антителами 73
3.9.1 Сэндвич-иммупоанализ ПСА 74
3.9.2. Кинетические измерения на микрочипах 74
3.10. Определение констант ассоциации (Kass) бинарного комплекса флуоресцентно меченного ПСА с иммобилизованными на микрочипе моиоклопальными антителами 75
3.11. Твердофазный иммупоферментпый анализ (ELISA) на 96-луночном планшете 78
ВЫВОДЫ 81
БЛАГОДАРНОСТИ 82
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 83
