Введение
Глава 1. Обзор данных литературы 7
1.1. Распределение и функции митохондрий в клетке 9
1.2. Цитоскелет, как средство внутриклеточного транспорта 10
1.2.1. Особенности системы микротрубочек 11
1.2.2. Особенности актинового цитоскелета 11
1.2.2.1. Полимеризация новых актиновых микрофиламентов. Агр2/3 -комплекс 12
1.2.2.2. Роль белков форминового семейства в организации актинового цитоскелета 13
1.2.3. Регуляция внутриклеточной организации микротрубочек и актинового цитоскелета 15
1.2.4. Участие двух цитоскелетных систем в транспорте митохондрий 18
1.3. Молекулярные моторы, участвующие в движении митохондрий 19
1.4. Регуляция распределения митохондрий как процесс переключения между стационарным и подвижным состояниями 22
1.5. Видеомикроскопические подходы к наблюдению митохондрий в живых клетках 26
Глава 2. Материалы и методы 30
2.1. Культивирование клеток 30
2.2. Флуоресцентная микроскопия 31
2.2.1. Фиксация клеток 31
2.2.2. Процедура иммунофлуоресцентного окрашивания 32
2.2.3. Антитела, используемые в работе 32
2.2.4. Окрашивание актина 33
2.3. ДНК конструкции 33
2.4. Трансфекция клеток 34
2.5. Микроинъекция 35
2.5.1. Микроинъекция кДНК 35
2.5.2. Микроинъекция белка 35
2.6. Получение видеомикроскопических данных 35
2.7. Обработка данных 36
Глава 3. Результаты исследования 38
3.1. Наблюдение митохондрий в живых клетках 38
3.2. Определение подвижности митохондрий клетках 39
3.3. Подвижность митохондрий находится под контролем внешних факторов 43
3.4. Лизофосфатидная кислота ингибирует подвижность митохондрий через белок RhoA 45
3.5. Белок RhoA регулирует распределение митохондрий, действуя через свои белки-мишени 47
3.5.1. Изменение активности Rho киназы не влияет на подвижность митохондрий 47
3.5.2. Белок mDial играет ключевую роль в регуляции транспорта митохондрий 49
3.6. Роль F-актина в ингибировании движения митохондрий 51
3.7. Полимеризация актина, стимулируемая независимыми от mDial способами, не снижает подвижность митохондрий 54
Глава 4. Обсуждение результатов 58
Выводы 62
Список использованной литературы 63
