Введение
Глава 1 Обзор литературы 14
1.1 Получение и применение отдельных производных 4-нитроанилина 14
1.2 Физические свойства и установление химической структуры объектов исследования 15
1.3 Метаболизм и токсикологическая характеристика 17
1.4 Идентификация объектов исследования 22
1.5 Количественное определение 28
1.6 Изолирование, концентрирование и очистка нимесулида и близких по структуре соединений 34
1.7 Распределение в теплокровных организмах и сохраняемость в трупном материале объектов исследования 38
ГЛАВА 2 Объекты исследования, материалы, оборудование, реактивы. синтез рабочих стандартов и подтверждение их структуры 40
2.1 Объекты исследования 40
2.1.1 Очистка и определение содержания нимесулида 40
2.1.2 Синтез, очистка и определение содержания 4-Н-2-ФА 41
2.1.3 Синтез, очистка и определение содержания 4-А-2-ФФМСА 42
2.1.4 Синтез, очистка и определение содержания 4-МСА-3-ФФА 44
2.1.5 Синтез, очистка и определение содержания 4-Г-2-ФФМСА 45
2.2 Приборы и оборудование 47
2.2 Реактивы 48
2.3 Материалы 49
2.4 Посуда 50
2.5 Подтверждение структуры рабочих образцов 50
2.5.1 Ядерный магнитный резонанс 1Н 50
2.5.2 Колебательная ИК-спектрофотометрия 51
2.5.3 Хроматография в тонком слое сорбента 52
2.6 Идентификация фотометрическими методами 53
2.6.1 Колебательная ИК-спектрофотометрия 53
2.6.2 Электронная УФ- и видимая спектрофотометрия 54
2.7 Идентификация хроматографическими методами 55
2.7.1 Нормальнофазовая ТСХ 55
2.7.2 Обращеннофазовая ТСХ 58
2.7.3 Нормальнофазовая ВЭЖХ 59
2.7.4 Обращеннофазовая ВЭЖХ 62
2.7.5 Капиллярная газовая хроматография с масс-спектрометрическим детектированием 66
ГЛАВА 3 Количественный анализ нимесулида и близких по структуре соединений 68
3.1 Определение спектрофотометрическим методом 68
3.1.1 Анализ нимесулида, 4-нитроанилина, 4-Н-2-ФА в ДМФА 68
3.1.2 Анализ 4-А-2-ФФМСА, 4-МСА-3-ФФА, 4-Г-2-ФФМСА в этаноле 71
3.2 Определение нормальнофазовой ВЭЖХ 76
3.2.1 Анализ нимесулида, 4-НА, 4-Н-2-ФА 77
3.2.2 Анализ нимесулида, 4-А-2-ФФМСА, 4-МСА-3-ФФА, 4-Г-2-ФФМСА79
3.3 Определение обращеннофазовой ВЭЖХ в градиентном режиме элюирования 81
ГЛАВА 4 Концентрирование и очистка объектов исследования 86
4.1 Экстракционные методы очистки и концентрирования 86
4.1.1 Жидкость-жидкостная экстракция гидрофобными экстрагентами 86
4.1.2 Жидкость-жидкостная экстракция гидрофобными экстрагентами в присутствии электролитов 89
4.2 Хроматографические методы очистки и концентрирования 90
4.2.1 Хроматография в тонком слое нормальнофазового сорбента 90
4.2.2 Хроматография в тонком слое обращеннофазового сорбента 92
4.2.3 Макроколоночная нормальнофазовая хроматография 93
4.2.4 Макроколоночная обращеннофазовая хроматография 95
4.3 Моделирование очистки извлечений из биоматериала в контрольных
опытах 96
4.3.1 Модель очистки в тонком слое нормальнофазового сорбента 97
4.3.2 Модель очистки в тонком слое обращеннофазового сорбента 98
4.3.3 Модель очистки с применением жидкость-жидкостной экстракции 98
4.3.4 Модель очистки на макроколонке с нормальнофазовым сорбентом 101
4.3.5 Модель очистки на макроколонке с обращеннофазовым силикагелем101
4.3.6 Модель очистки комбинацией жидкость-жидкостной экстракции и макроколоночной нормальнофазовой хроматографии 103
4.3.7 Модель очистки комбинацией жидкость-жидкостной экстракции и макроколоночной обращеннофазовой хроматографии 103
ГЛАВА 5 Определение нимесулида и близких по структуре соединений в биологическом материале 104
5.1 Изолирование из биологической ткани настаиванием. Поиск оптимальных
условий изолирования 104
5.1.1 Выбор изолирующего агента 104
5.1.2 Выбор времени настаивания с оптимальным изолирующим агентом113
5.1.3 Выбор кратности настаивания и количества изолирующего агента при оптимальном времени изолирования 113
5.2 Методики изолирования из трупных органов и биожидкостей 115
5.2.1 Методика изолирования из ткани трупного органа (печени) 121
5.2.2 Методика изолирования из крови 122
5.2.3 Методика изолирования из плазмы крови 122
5.2.4 Методика изолирования из мочи 123
5.3 Определение на основе разработанных специальных схем очистки извлечений. Установление определяемого минимума в биоматериале 123
5.3.1 Определение с использованием очистки комбинацией жидкость-жидкостной экстракции и макроколоночной нормальнофазовой хроматографии 124
5.3.2 Определение с использованием очистки комбинацией жидкость-жидкостной экстракции и макроколоночной обращеннофазовой хроматографии 126
ГЛАВА 6 Сохраняемость в трупном материале и распределение в организме теплокровных животных исследуемых соединений 130
6.1 Распределение в организме теплокровных животных (крысы) 130
6.1.1 Характер распределения нимесулида и его метаболитов 131
6.1.2 Характер распределения близких к нимесулиду структур 133
6.2 Сохраняемость анализируемых соединений в трупном материале 134
6.2.1 Сохраняемость нимесулида и продуктов его трансформации в трупном материале 135
6.2.2 Сохраняемость 4-нитроанилина, 4-Н-2-ФА и 4-Г-2-ФФМСА 137
Выводы 142
Список сокращений и условных обозначений 145
Список литературы 146
Приложение 174
