Введение
2. Обзор литературы 11
2.1 Краткая история изучения ретровирусов и ретроэлементов 11
2.2 Жизненный цикл ретровирусов, их строение и синтез LTR 12
2.3 Ретроэлементы: происхождение, структура и классификация 15
2.4 Семейство HERV-K(HML-2) 21
2.5 Функциональные элементы в составе LTR. 23
2.6 Биологическое значение LTR 28
2.7 Инсулятор: блокирование взаимодействия энхансера с промотором 33
2.8 Инсулятор: защита от эффекта положения 34
2.9 Структурные особенности отдельных инсуляторов 35
2.10 Функции отдельных инсуляторов 39
2.11 Преодоление активности инсулятора 44
2.12 Механизмы действия инсуляторов 46
2.13 Перспективы использования инсуляторов 51
2.14 Заключение 52
3. Материалы и методы 54
3.1 Материалы 54
3.2 Методы 57
3.2.1 ПЦР амплификация 57
3.2.2 Трансформация E.coli и выделение плазмид 58
3.2.3 Рестрикция и лигирование 59
3.2.4 Культивирование клеток 60
3.2.5 Трансфекция клеток 62
3.2.6 Позитивно-негативная селекция 63
3.2.7 Получение клеточного лизата 63
3.2.8 Определение количества белка 64
3.2.9 Определение активности р-галактозидазы 64
3.2.10 Определение активности люциферазы 64
3.2.11 Выделение геномной ДНК 65
3.2.12 Картирование фрагментов в геноме человека 65
4. Результаты и обсуждение 66
4.1 LTR: Обоснование выбора объекта 66
4.2 Описание опытных конструкций и экспериментального подхода 70
4.3 Промоторная активность LTR 71
4.4 Негативный регуляторний элемент (НРЭ) 77
4.5 Энхансерная активность LTR 78
4.6 Тканеспецифичность энхансера SV40 80
4.7 Инсуляторная активность S/MAR 82
4.8 Система для поиска инсуляторов 87
4.9 Идентификация и картирование инсуляторов 98
Выводы 104
Список литературы 105
