Введение
ГЛАВА 1 CLASS Введени CLASS е 3
ГЛАВА 2 Обзор литературы 6
2.1 Особенности биологии и экологии листерий и их значение в распространении пищевого листериоза 6
2.1.1 Общая характеристика и таксономия листерий 6
2.1.2 Биология возбудителя 8
2.1.3 Факторы патогенности листерий и их роль при взаимодействии с макроорганизмом 10
2.1.4 Регуляция экспрессии факторов патогенности 14
2.1.5 Резистентность к температуре и другим факторам внешней среды 17
2.1.6 Листериоз как пищевая инфекция 19
2.1.7 Листерий в продуктах питания 22
2.2 Методы лабораторной диагностики и идентификации листерий 26
2.2.1 Серологическая диагностика 26
2.2.2 Бактериологическая диагностика 30
2.2.3 Идентификация культур 36
ГЛАВА 3 Материалы и методы 41
3.1 Использованные штаммы 41
3.2 Микробиологические методы 42
3.2.1 Условия культивирования 42
3.2.2 Выделение листерий из продуктов питания 43
3.2.3 Идентификация клонов, выделенных из продуктов питания бактериологическими методами 44
3.2.4 Приготовление сред и определение лецитиназной активности 44
3.3 Молекулярно-генетические методы 45
3.3.1 Приготовление лизатов клеток листерий для проведения ПЦР 45
3.3.2 Полимеразная цепная реакция 45
3.3.3 Осаждение продукта ПЦР для последующего анализа 46
3.3.4 Рестрикционный анализ (ПЦР-РА) 47
3.3.5 Приготовление образцов для секвенирования 47
ГЛАВА 4 Результаты 48
4.1 Размножение листерий в молочных продуктах 48
4.2 Отработка методики выделения листерий из продуктов питания 49
4.2.1 Проверка различных селективных питательных сред 49
4.2.2 Выделение листерий из продуктов питания и дальнейшая идентификация общепринятыми микробиологическими методами 52
4.2.3 Идентификация листерий методом ПЦР 56
4.3 Разработка метода лецитиназной активности 59
4.4 Типирование Listeria monocytogenes на основе полиморфизма генов факторов патогенности 70
4.4.1 Анализ штаммов L. monocytogenes в ПЦР 70
4.4.2 Рестрикционный анализ фрагмента, полученного в ПЦР 71
4.4.3 Определение сайтов изменчивости у полученных групп 73
ГЛАВА 5 CLASS Обсуждени CLASS е 78
Глава 6 выводы 85
Список литературы 86
