Введение
Глава 1. Интерполиэлектролитные комплексы 9
1.1. Образование, строение и свойства 9
1.2. Белок-полиэлектролитные комплексы 20
Глава 2. Формирование и свойства ПЭ пленок, полученных методом последовательной адсорбции полиэлектролитов (ПАП) на плоских подложках 25
2.1. Получение пленок методом ПАП 25
2.2. Структура и свойства "многослойных" ПЭ пленок 26
Глава 3. Полиэлектролитные микрокапсулы, полученные методом ПАП ..31
3.1. Формирование полиэлектролитных оболочек на поверхности коллоидных частиц 31
3.2. Образование полых полиэлектролитных микрокапсул 36
3.3. Некоторые физико-химические свойства полых ПЭ микрокапсул 40
Глава 4. Включение макромолекулярных соединений в ПЭ
микрочастицы/капсулы с применением метода ПАП 44
4.1. Мультислои макромолекул на поверхности коллоидных частиц 45
4.2. Включение макромолекул в ПЭ микрокапсул путем изменения проницаемости их оболочки 45
4.3. Покрытие кристаллов белков ПЭ оболочкой 45
4.4. Метод, основанный на преципитации вещества на поверхности коллоидной матрицы 47
4.5. Включение макромолекул в микрокапсулы, полученные на основе МФ-микрочастиц 47
4.6. Обобщение методов включения: преимущества и недостатки. Постановка задачи 49
Глава 5. Кристаллизация карбоната кальция 52
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 6. Материалы, оборудование и методы исследования 54
6.1. Материалы и реактивы 54
6.2. Оборудование 55
6.3. Методы исследования 56
6.3.1. ПЭ микрочастицы, полученные на высоленных агрегатах белка 56
а. Получение ПЭ микрочастиц 56
б. Определение содержания белка в микрочастицах и растворах 57
в. Определение эстеразной активности химотрипсина 57
г. Высвобождение белка из микрочастиц при различных рН 58
д. Изучение кинетики высвобождения белка из микрочастиц 58
е. Повторное включение белка в ПЭ микрочастицы, полностью
высвободившие белок 58
6.3.2. Белок-содержащие СаСОз микрочастицы 59
а. Получение СаСОз микрочастиц 59
б. Включение белков в СаСОз микрочастицы методом адсорбции в порах 59
в. Получение белок-содержащих СаСОз микрочастиц методом совместного осаждения 60
6.3.3. Включение белков в ПЭ микросферы "каркасного" типа 61
а. Получение "каркасных" ПЭ микросфер (ПАА/ПСС)4 61
б. Иммобилизация белков путем включения в сформированные ПЭ
микросферы 61
в. Изучение высвобождения белков из микросфер 62
6.3.4. Измерение активности ГОД 63
6.3.5. Измерение амидазной активности ХТР 63
6.3.6. Получение магнитных наночастиц Рез04 64
6.3.7. Модификация микросфер магнитными наночастицами Fe304 65
6.3.8. Получение ПЭ микросфер путем ПАП на белок-содержащих СаСОз микрочастицах 65
а. Включение белков в микросферы (ПАА/ПСС)4 65
б. Включение Asp f2 в микросферы (ПЛЛ/АЛГ)4.
Эксперименты in vivo 66
6.3.9. Белок-содержащие гелевые микросферы с ПЭ оболочкой 67
а. Иммобилизация ОВА 67
б. Модификация микросфер ПГК-ПЭГ. Изучение адсорбции БСА 68
6.3.10. Изучение стабильности комплекса ПСС-ПАА при изменении рН .68
6.3.11. Получение ПЭ и белков, меченых флуоресцентной меткой 69
6.3.12. Подготовка ДС и ДЕ для использования в работе 69
6.4. Физико-химические методы, использованные при работе с микрочастицами 70
6.4.1. Световая оптическая микроскопия 70
6.4.2. Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) 70
6.4.3. Трансмиссионная электронная микроскопия (ТЕМ) 71
6.4.4. Метод адсорбции/десорбции азота (метод Брунауэра-Эммета-Теллера) 71
6.4.5. Конфокальная флуоресцентная сканирующая микроскопия (КСФМ) 71
6.4.6. Флуоресцентная микроскопия 72
6.4.7. Микрогравиметрия 72
6.4.8. Спектроскопия координационного рассеяния (СКР) 72
6.4.9. Элементный анализ 72
6.4.10. Расчет концентрации микросфер 73
6.4.11. Измерение гидродинамического радиуса полиэлектролитов 73
6.4.12. Измерение -потенциала СаСОз микрочастиц 73
6.4.13. Лиофильное высушивание 73
6.4.14. УФ-видимая спектроскопия 74
6.4.15. Флуоресцентная спектроскопия 74
6.4.16. Рентгеноструктурный анализ широкого угла рассеяния 74
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 7. Иммобилизация ХТР путем ПАП на агрегатах белка 75
7.1. Получение, структура и свойства белок-содержащих микрочастиц ....75
7.2. Высвобождение белка из микрочастиц 80
7.3. Изучение активности иммобилизованного ХТР 85
Глава 8. Включение белков в ПЭ микросферы "каркасного" типа 86
8.1. Синтез и характеристика пористых микрочастиц из карбоната кальция .86
8.2. Получение и структура (ПАА/ПСС)4 микросфер "каркасного" типа 96
8.3. Белок-содержащие "каркасные" ПЭ микросферы 105
а. Включение белков в сформированные микросферы (ПАА/ПСС)4 105
б. Создание дополнительной ПЭ оболочки на поверхности
"каркасных" микросфер с белком 109
в. Изучение каталитической активности микросфер с ХТР в
водно-органических смесях 115
г. Модификация микросфер наночастицами БезСХ» 117
8.4. Формирование ПЭ микросфер путем ПАП на белок-содержащих СаСОз
микрочастицах 119
8.4.1. Изучение включения белков в СаСОз микрочастицы 119
а. Метод адсорбции в порах (АП) 119
б. Метод совместного осаждения (СО) 126
8.4.2. Получение белок-содержащих ПЭ микросфер 131
а. Включение белков в микросферы (ПАА/ПСС)4 131
б. Включение Asp f2 в микросферы (ПЛЛ/АЛГ)4.
Изучение иммунного ответа на микросферы с Asp f2 in vivo 134
8.5. Сравнительные характеристики методов включения белков в ПЭ микросферы "каркасного типа" 137
Глава 9. Иммобилизация белков в гелевые микросферы с ПЭ оболочкой ..138
9.1. Включение ОВА в гелевые Са-альгинатные микросферы 138
9.2. Высвобождение ОВА из Са-альгинатных микросфер 142
9.3. Модификация микросфер ПГК-ПЭГ 142
ВЫВОДЫ 146
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 148
