Введение
Глава 1. Обзор литературы 15
1.1 Возбудители псевдотуберкулёза и чумы 15
1.1.1 Общая характеристика бактерий Y. pseudotuberculosis и Y. pestis 15
1.1.1.1 Описание вызываемых Y. pseudotuberculosis и Y. pestis заболеваний 15
1.1.1.2 Филогенез патогенных иерсиний 18
1.1.1.3 Лечебно-профилактические средства и их недостатки 22
1.1.2 Характеристика поверхностных структур псевдотуберкулёзного и чумного микробов 24
1.1.2.1 Строение наружной мембраны грамотрицательных бактерий 24
1.1.2.2 Липополисахарид 26
1.1.2.3 Белки наружной мембраны 30
1.1.2.4 Везикулы чумного и псевдотоберкулёзного микробов 34
1.1.3 Моноклональные антитела к антигенам Y. pestis и Y. pseudotuberculosis 35
1.2 Бактериофаги, специфичные в отношении Y. pseudotuberculosis и Y. pestis 38
1.2.1 Общие сведения о бактериофагах 38
1.2.1.1 Жизненный цикл бактериофагов 38
1.2.1.2 Химический состав и морфология бактериофагов 39
1.2.1.3 Химическая природа рецепторов бактериофагов 40
1.2.2 Чумные и псевдотуберкулёзные бактериофаги 43
1.2.2.1 Характеристика чумных бактериофагов 43
1.2.2.2 Характеристика псевдотуберкулёзных бактериофагов 45
1.2.2.3 Использование бактериофагов для лечения и диагностики 46
1.2.3 Методические подходы к характеристике рецепторов бактериофагов 49
Экспериментальные исследования 51
Глава 2. Материалы и методы 51
2.1 Штаммы микроорганизмов 51
2.2 Бактериофаги 51
2.3 Антигенные препараты 51
2.4 Антитела и антивидовые конъюгаты 52
2.5 Оборудование 53
2.6 Методы 53
2.6.1 Определение концентрации микроорганизмов 53
2.6.2 Определение титра бактериофагов 54
2.6.3 Методика выделения и очистки иерсиниозных бактериофагов 54
2.6.4 Методика определения влияния инфицирующей дозы (MOI) на выход бактериофага псевдотуберкулёзного диагностического 56
2.6.5 Оценка культуральных свойств бактериофагов при различных температурах 57
2.6.6 Оценка влияния бактериофагов на везикулообразование иерсиний 58
2.6.7 Методика оценки адсорбционной активности живых и убитых бактерий иерсиний 58
2.6.8 Определение химической природы рецепторов бактериофагов 59
2.6.9 Методика оценки конкуренции антител и бактериофагов за сайты адсорбции 60
2.6.10 Твёрдофазный иммуноферментный анализ 60
2.6.11 Обработка антигенных препаратов периодатом натрия 61
2.6.12 Обработка антигенных препаратов протеазами 62
2.6.13 Вертикальный электрофорез 63
2.6.14 Иммуноблотинг 64
2.6.15 Дот-вариант ИФА 64
2.6.16 Просвечивающая электронная микроскопия 65
2.6.17 Статистическая обработка полученных результатов 65
Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение 66
3.1 Культурально-морфологические свойства иерсиниозных бактериофагов 66
3.1.1 Влияние температуры культивирования иерсиний на литическую способность бактериофагов псевдотуберкулёзного диагностического и чумного Покровской 66
3.1.2 Особенности глубинного культивирования бактериофага псевдотуберкулёзного диагностического 68
3.1.3 Морфология псевдотуберкулёзного диагностического бактериофага 71
3.1.4 Влияние бактериофагов на морфологию клеток и везикулообразование иерсиний 73
3.1.4.1 Влияние бактериофага чумного Покровской на морфологию клеток и везикулообразование Y. pestis 73
3.1.4.2 Влияние бактериофага псевдотуберкулёзного диагностического на морфологию клеток и везикулообразование Y. pseudotuberculosis 76
3.2 Иммунохимическая природа антигенных эпитопов, распознаваемых моноклональными антителами МКАт1-9 81
3.2.1 Взаимодействие МКАт с антигенами иерсиний 81
3.2.2 Определение химической природы эпитопов, выявляемых МКАт, методом ИФА 84
3.2.2.1 Иммунохимическая характеристика окисленных периодатом натрия антигенных препаратов 84
3.2.2.2 Иммунохимическая характеристика обработанных протеазами антигенных препаратов 88
3.2.3 Иммунохимическая характеристика МКАт1-9 методом иммуноблотинга 90
3.2.3.1 Определение химической природы эпитопов, выявляемых МКАт1-4 90
3.2.3.2 Определение химической природы эпитопов, выявляемых МКАт5-9 97
3.3 Химическая природа рецепторов бактериофагов псевдотуберкулёзного диагностического и чумного Покровской 100
3.3.1 Отработка метода адсорбции иерсиниозных бактериофагов на бактериальных клетках 100
3.3.2 Определение химической природы рецепторов бактериофага Покровской 104
3.3.3 Определение химической природы рецепторов псевдотуберкулёзного диагностического бактериофага 105
3.4 Конкуренция иерсиниозных бактериофагов и МКАт1-9 за сайты связывания на поверхности бактериальных клеток 107
3.4.1 Конкуренция бактериофага Покровской и МКАт 107
3.4.2 Конкуренция псевдотуберкулёзного диагностического бактериофага и МКАт 109
Заключение 112
Выводы 116
Библиографический список 118
