ВВЕДЕНИЕ ..................................................................................................................4
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................. 15
1.1 Вирус клещевого энцефалита .............................................................................. 15
1.1.1 Строение вириона и цикл репликации вируса клещевого энцефалита .......... 20
1.1.2 Белок Е вируса клещевого энцефалита ............................................................ 28
1.1.3 Современные средства лечения, профилактики и контроля клещевого
энцефалита........................................................................................................ 31
1.1.4 Потенциальные молекулы-ингибиторы вируса клещевого энцефалита ........ 36
1.2 Лекарственные средства на основе растений ..................................................... 39
1.2.1 Биологические активные вещества, синтезируемые растениями................... 41
1.2.2 Противовирусные биологически активные вещества на основе растительных
источников........................................................................................................ 43
1.2.3 Опасения, связанные с применением растительных источников................... 48
1.2.4 Получение лекарственных средств из растений.............................................. 51
1.3 Аптамеры.............................................................................................................. 57
1.3.1 Современное состояние изучения аптамеров .................................................. 57
1.3.2 Отбор аптамеров (SELEX)................................................................................ 64
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ..................................................................... 68
2.1 Материалы............................................................................................................ 68
2.2 Методы.................................................................................................................. 69
2.2.1 Проведение жидкостной хроматографии......................................................... 69
2.2.2 Проведение высокоэффективной жидкостной хроматографии/
масс-спектрометрии ......................................................................................... 70
3
2.2.3 Определение инфекционной активности вируса по бляшкообразующим
единицам........................................................................................................... 71
2.2.4 Оценка индекса вирулицидности ..................................................................... 72
2.2.5 Определение цитотоксического действия проб на культуру клеток.............. 72
2.2.6 Сравнение ингибирования веществ при ко-инкубации с зараженной
культурой клеток.............................................................................................. 73
2.2.7 Проведение отбора ДНК-аптамеров (SELEX)................................................. 74
2.2.8 Клонирование и секвенирование библиотеки аптамеров ............................... 77
2.2.9 Оценка вирулицидной активности последовательностей аптамеров к вирусу
клещевого энцефалита ..................................................................................... 78
2.2.10 Статистическая обработка данных................................................................. 79
ГЛАВА 3 ПРОТИВОВИРУСНЫЕ СВОЙСТВА ЭКСТРАКТОВ ........................... 80
3.1 Прямое вирулицидное действие растительных экстрактов ............................... 80
3.2 Панель вирулицидного действия фракций после хроматографического
разделения ............................................................................................................ 81
3.3 Анализ спектра масс вирулицидных фракций после жидкостной
хроматографии ..................................................................................................... 83
3.4 Анализ спектра масс вирулицидных фракций после высокоэффективной
жидкостной хроматографии ................................................................................ 85
ГЛАВА 4 ПРОВЕРКА ВИРУЛИЦИДНОГО ДЕЙСТВИЯ АПТАМЕРОВ
И СИНТЕТИЧЕСКИХ АНАЛОГОВ ИДЕНТИФИЦИРОВАННЫХ
ВЕЩЕСТВ ИЗ T. CHEBULA.................................................................. 100
ЗАКЛЮЧЕНИЕ........................................................................................................ 110
ВЫВОДЫ ................................................................................................................. 113
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ............................. 114
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ........................................................................................ 117
