Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Действие ионизирующего излучения на живые организмы 12
1.1.2. Становление понятия и начало изучения проблемы 12
1.1.3. Повреждение и репарация ДНК в ответ на непосредственное действие ионизирующего излучения на клетку 13
1.1.4. «Немишенные» эффекты облучения и их роль в реакции клеток на ионизирующее излучение 15
1.1.5. Повреждающее действие ионизирующего излучения на органы и ткани организма 17
1.1.6. Терапевтические мероприятия, направленные на нивелирование последствий действия ионизирующего излучения 20
1.2. Потенциал мультипотентных мезенхимных стромальных клеток в терапии эффектов ионизирующего излучения 22
1.2.1. Природа и функции мультипотентных мезенхимных стромальных клеток 23
1.2.2. Возможности и перспективы применения мультипотентных мезенхимных стромальных клеток в медицине 24
1.2.3. Механизм терапевтического действия мультипотентных мезенхимных стромальных клеток на облученные организмы 26
1.2.4. Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки как котрансплантат при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток 27
1.2.5. Терапевтическое действие мультипотентных мезенхимных стромальных клеток в зоне повреждения 28
1.2.6. Паракринный механизм терапевтического эффекта мультипотентных мезенхимных стромальных клеток 29
1.3. Внеклеточные везикулы как механизм межклеточной коммуникации и сигналинга, их участие в физиологических и патофизиологических процессах организма 31
1.3.1. История открытия и изучения внеклеточных везикул 31
1.3.2. Классификация, биогенез и выделение внеклеточных везикул 32
1.3.3. Особенности состава и функции внеклеточных везикул 33
1.3.4. Терапевтический и диагностический потенциал внеклеточных везикул 36
Глава 2. Материалы и методы исследования 39
2.1. Выделение и ведение клеточных культур 39
2.2. Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки костного мозга человека 40
2.3. Консервация и подготовка клеток для последующих манипуляций 41
2.4. Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки жировой ткани крысы и человека 42
2.5. Характеристика культур стволовых клеток 43
2.6. Выделение внеклеточных везикул 44
2.7. Просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ) 45
2.8. Анализ траекторий наночастиц (NTA) 45
2.9. Экспериментальные группы 2.10. Измерение веса животных 48
2.11. Поведенческий тест «Открытое поле» 48
2.12. Лазерная корреляционная спектроскопия (ЛКС) 48
2.13. Исследование изменений в картине крови 49
2.14. Оценка миграции ММСК 50
2.15. Гистологическое исследование селезенки, печени и поджелудочной железы 50
2.16. Индекс повреждения тканей исследуемых органов 54
2.17. Статистическая обработка данных 55
Глава 3. Исследование действия мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга человека на лабораторных животных после острого экспериментального облучения 56
3.1. Исследование изменений физиологических параметров после действия гамма излучения и введения ММСК КМ на организменном уровне 59
3.2. Исследование особенностей клеточных реакций после действия гамма излучения и введения ММСК КМ 62
3.3. Исследование сдвигов в субфракционном составе сыворотки крови после действия гамма-излучения и введения ММСК КМ 65
3.4. Гистологическое исследование изменений на органном уровне после действия гамма-излучения и введения ММСК КМ 68
3.5. Оценка миграции ММСК в облученном организме 74
Глава 4. Выделение и характеристика внеклеточных везикул, продуцируемых стволовыми клетками 76
Глава 5. Исследование внеклеточных везикул в качестве эффекторов терапевтического действия ММСК КМ человека на облученных животных 82
5.1. Изменение прироста массы тела животных после воздействия гамма излучения и введения внеклеточных везикул 82
5.2. Реакция системы кроветворения на облучение и после введения внеклеточных везикул 83
5.3. Сдвиги в субфракционном составе сыворотки крови животных после воздействия гамма-излучения и введения внеклеточных везикул 85
5.4. Изменения на органном уровне после воздействия гамма-излучения и введения внеклеточных везикул 87
5.5. Оценка роли внеклеточных везикул в реализации терапевтического эффекта мезенхимных стромальных стволовых клеток костного мозга человека 89
Заключение 94
Выводы 99
Список сокращений 100
Список литературы 102
