Введение
1. Введение 5
2. Обзор литературы 8
2.1. Коронавирусная диарея новорожденных телят 8
2.1.1. Эпизоотология 8
2.1.2. Клинические признаки 9
2.1.3. Патогенез и патологоанатомические изменения 10
2.1.4. Диагностика 11
2.1.5. Специфическая профилактика 12
2.2. Коронавирусная инфекция дыхательных путей 13
2.3. "Зимняя дизентерия" 14
2.4. Характеристика семейства Coronaviridae 15
2.5. Структура вириона и физико-химические свойства коронавируса крупного рогатого скота 17
2.6. Геном коронавируса крупного рогатого скота 19
2.7. Основные структурные белки коронавируса крупного рогатого скота 20
2.7.1. Нуклеокапсидный протеин 20
2.7.2. Интегральный мембранный протеин 20
2.7.3. Спайковый гликопротеин 21
2.7.4. Гемагтлютинин-эстеразный гликопротеин 22
2.8. Репликация коронавируса крупного рогатого скота 23
3. Собственные исследования 30
3.1. Материалы 30
3.1.1 Штаммы вируса 30
3.1.2. Оборудование 30
3.1.3. Растворы и реактивы 31
3.2. Методы 32
3.2.1. Выделение суммарной РНК 32
3.2.2. Реакция обратной транскрипции 33
3.2.3. Амплификация кДНК 33
3.2.4. Вариант ПЦР "continuous" 34
3.2.5. Очистка продуктов ПЦР 35
3.2.6. Реакция секвенирования 35
3.2.7. Компьютерный анализ данных 36
4. Результаты и обсуждение собственных исследований 36
4.1. Разработка и применение метода выявления и штаммовой дифференциации коронавируса крупного рогатого скота с помощью ПЦР и секвенирования фрагмента НЕ гена 36
4.1.1. Исследование профиля вариабельности НЕ гена 36
4.1.2. Выбор первичной структуры праймеров 40
4.1.3. Оптимизация условий постановки ПЦР и секвенирования 44
4 1 .4, Апробация метода и анализ полученных данных 46
4.2. Разработка и применение метода выявления и штаммовой дифференциации коронавируса крупного рогатого скота с помощью ПЦР и секвенирования вариабельной области S гена 58
4.2.1. Исследование профиля вариабельности S гена 58
4.2.2. Выбор праймеров, условий постановки ПЦР и секвенирования 61
4.2.3. Апробация методам анализ полученных данных 62
Выводы 86
