Введение
Обзор литературы 8
"Рековерин и другие паранеопластические антигены" 8
1. Рековерин 8
1.1. Рековерин как белок зрительной трансдукции 8
1.1.1. Тканевая и клеточная локализация 8
1.1.2. Основные характеристики 10
1.2. Рековерин как паранеопластический антиген 12
1.2.1. Аберрантная экспрессия рековерина в опухолях и клеточных линиях 13
1.2.2. Современные представления о причинах развития паранеопластической дегенерации сетчатки у онкологических больных 14
1.2.3. Модельные системы CAR-синдрома 16
1.2.4. Механизмы паранеопластической дегенерации сетчатки 17
1.2.5. Влияние аберрантной экспрессии рековерина
на процессы, происходящие в раковых клетках.. 19
2. РНК-связывающие белки и соответствующие им неврологические синдромы 21
2.1. Hu-антигены 21
2.2. Ri-антигены 23
3. ДНК-связывающий белок Yo-антиген и парансопластическая дегенерация мозжечка 24
4. Потенциалзависимые кальциевые каналы и миастеническии синдром Ламберта-Итона 25
5. Потенциалзависимые калиевые каналы и нейромиотония 27
6. Ацстилхолиновый (никотиновый) рецептори миастения 27
7. Амфифизин и синдром "скованного человека" 28
Материалы и методы 30
1. Реактивы 30
2. Материалы 30
3. Аналитические процедуры 31
3.1. Определение концентрации белков 31
3.2. SDS-электрофорез в полиакриламидном геле 31
3.3. Нативный электрофорез в полиакриламидном геле 32
3.4. Иммуноблоттинг 32
3.5. ELISA 33
3.6. Цитоиммуногистохимический анализ серийных парафиновых срезов опухолевых тканей 34
4. Получение рекомбинантного мири сто ил ирован ного рековерина 34
5. Получение иммобилизованных белков 36
6. Выделение поликлоналышх моноспецифических антител против рековерина 37
7. Культивирование клеточных линий 37
8. ПЦР с обратной транскриптазой 38
9. Количественный ПЦР с обратной транскриптазой 39
10. Анализ уровня метилирования ДНК при помощи бисульфитного сиквенса 40
11. Выделение р26 из тканей крысы 41
Результаты и их обсуждение 43
1. Рековерин в раковых опухолях и нормальных тканях 44
1.1. Экспрессия рековерина в злокачественных опухолях 44
1.1.1. Иммуногистохимический анализ срезов опухолей легких 46
1.1.2. Анализ экспрессии мРНК рековерина в раковых опухолях 49
1.2. Экспрессия рековерина в нормальных тканях 53
2. Исследование механизмов аберрантной экспрессии рековерина.. 63
2.1. Анализ статуса метилирования области промотора и первого экзона гена рековерина в нормальных тканях и раковых опухолях ...64
2.2. Исследование влияния различных агентов на уровень экспрессии рековерина в клеточной линии рака легких 70
2.2.1. Влияние ДАЦ, ТСА и бутирата натрия на уровень экспрессии мРНК рековерина 73
2.2.2. Изменение уровня метилирования области промотора и первого экзона гена рековерина в NCI-H82 под воздействием ДАЦ...75
2.2.3. Исследование влияния ДАЦ, ТСА и бутирата натрия
на уровень экспрессии рековерина 79
3. Рековерин как потенциальный маркер злокачественной трансфомации 82
3.1. Серийный анализ опухолей легких на присутствие в них экспрессии рековерина 82
3.2. Серийный анализ образцов сыворотки крови онкологических
больных на присутствие аутоантител против рековерина 85
Выводы 95
Список литературы 96
