Введение
ВВЕДЕНИЕ 7
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ И
1.1. ЦИТОКИНЫ СЕМЕЙСТВА LIF 11
1.2. ХАРАКТЕРИСТИКИ ЭМБРИОНАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК (ЭСК) МЛЕКОПИТАЮЩИХ 15
1.3. ОРГАНИЗАЦИЯ ГЕНА lif. 24
1.4. МОЛЕКУЛЯРНАЯ СТРУКТУРА БЕЛКА LIF 28
1.5. ЗНАЧЕНИЕ ИЗОФОРМЦИТОКИНА LIF 31
1.6. МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ LIF НА ЭСК МЛЕКОПИТАЮЩИХ...33
1.7. ПУТИЕШ-СИГНАЛИЗАЦИИВЭСК... 38
1.8. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭСК МЛЕКОПИТАЮЩИХ invitro 43
2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ 52
2.1. ПЛАЗМИДНЫЕ ВЕКТОРЫ 52
2.2. КЛОНИРОВАНИЕ КДНК ГЕНА 52
2.3. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ ДНК В АГАРОЗНОМ ГЕЛЕ 55
2.4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ГЕНА /// 56
2.5. ПОЛУЧЕНИЕ ПРОКАРИОТИЧЕСКОГО БЕЛКА LIF 56
2.6. БЕЛКОВЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПААГ 58
2.7. ДИАЛИЗ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЖА LIF 59
2.8. WESTERN-БЛОТ АНАЛИЗ (ИММУНОБЛОТТИНГ) 59
2.9. ПОЛУЧЕНИЕ LIF В КЛЕТКАХ ЛИНИИ COS-1 60
2.10. ОЦЕНКА ЭКСПРЕССИИ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА LIF 62
2.10.1. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ (ИФА) 62
2.10.2. ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ LIF 63
2.11. ТЕСТИРОВАНИЕ АКТИВНОСТИ LIF НА ЭСК МЫШИ 63
2.12. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕЭСК in vitro 64
2.12.1. МОРФОЛОГИЧЕСКИЙ КРИТЕРИЙ ЭСК 64
2.12.2. ПРОЛИФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ И ВРЕМЯ УДВОЕНИЯ 65
2.12.3. ЦИТОХИМИЧЕСКИЙ ТЕСТ НА ВЫЯВЛЕНИЕ ЭЩФ 65
2.13. ДИФФЕРЕНЦИРОВКА ЭСК МЫШИ ЛИНИИ Rl in vitro 66
2.14. СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ 67
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 67
3.1. ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА И/В РАЗНЫХ ТИПАХ КЛЕТОК 67
3.2. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ РЕКОМБИНАНТНЫХ LIF .82
3.3. ИНДУКЦИЯ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ ЭСК МЫШИ В УСЛОВИЯХ ПРОЛОНГИРОВАННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ С LIF-COS 90
4. ВЫВОДЫ 104
5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 106
