Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 19
1.1. Теломераза 19
1.1.1. Проблема концевой репликации линейных молекул ДНК 19
1.1.2. Теломеры 19
1.1.3. Лимит Хейфлика 21
1.1.4. Теломераза 22
1.1.4.1. Каталитическая субъединица теломеразы hTERT 23
1.1.4.1.1. Регуляция транскрипции гена hTERT 24
1.1.4.1.2. Альтернанивный сплайсинг транскрипта гена hTERT 24
1.1.4.1.3. Пострансляционная модификация белка hTERT 26
1.1.4.1.3.1. Фосфорилирование/дефосфорилирование белка hTERT 26
1.1.4.1.3.2. Транспорт hTERT в ядро 26
1.1.4.2. РНК-компонент теломеразы hTR 27
1.1.4.3. Как работает теломераза 27
1.1.4.4. Теломеры, теломераза и шелтериновый комплекс 28
1.1.4.5. Активность теломеразы в нормальных и опухолевых клетках человека 31
1.1.4.6. Иммортализация, злокачественная трансформация и теломераза 33
1.1.4.6.1. Иммортализация 33
1.1.4.6.2. Злокачественная трансформация 34
1.1.4.7. Активность теломеразы при онкопатологиях щитовидной железы 37
1.2. Онкобелок с-Мус 39
1.2.1. Строение гена и белка 39
1.2.2. с-Мус как транскрипционный фактор 41
1.2.3. Функции с-Мус: регуляция клеточного цикла, дифференцировки и апоптоза 42
1.2.4. с-Мус и теломераза 44
1.2.5. с-Мус при онкопатологиях щитовидной железы 45
1.3. Онкосупрессор р53 47
1.3.1. Строение гена и белка 47
1.3.2. Гены-мишени белка р53 49
1.3.3. Нарушение функций р53 при опухолях 50
1.4. Транскрипционный фактор P65/RelA 52
1.4.1. Семейство транскрипционных факторов NF-KB 52
1.4.2. Структура гена RelA 54
1.4.3. Гены-мишени транскрипционного фактора NF-KB 55
1.4.4. Активность транскрипционных факторов NF-KB при раке 57
1.5. Циклооксигеназа СОХ-2 58
1.6. Матрилизин (ММР-7) 61
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 65
2.1. Материалы 65
2.1.1. Реактивы 65
2.1.2. Приборы и компьютерные программы 65
2.1.2.1. Приборы 65
2.1.2.2. Компьютерные программы 66
2.1.3. Клеточные линии 66
2.1.4. Клинический материал 67
2.2. Методы исследования 71
2.2.1. Анализ активности теломеразы 71
2.2.1.1. Получение экстрактов для анализа активности теломеразы 71
2.2.1.2. Измерение концентрации белка в экстрактах 71
2.2.1.3. Анализ активности теломеразы методом TRAP с
модификациями 72
2.2.2. Анализ экспрессии генов hTERT, с-Мус, р53, СОХ-2, TRF\, p65/RelA,
ММР-1 и р-актина 74
2.2.2.1. Выделение РНК 74
2.2.2.2. ОТ-ПЦР 75
2.2.3. Статистическая обработка результатов 79
2.2.4. ROC-анализ диагностической ценности онкомаркеров 79
ГЛАВА 3. Результаты исследования и их обсуждение 84
3.1. Подбор праймеров и оптимизация условий проведения ОТ-ПЦР 84
3.2. Анализ активности теломеразы в тканевых и клеточном экстрактах от пациентов с различными онкопатологиями щитовидной железы 87
3.3. Исследование экспрессии генов hTERT, с-Мус, р53, СОХ-2, TRF1, p65/RelA, ММР-1 и З-актина в опухолях щитовидной железы 91
3.4. Особенности экспрессии онкомаркеров и активность теломеразы у больных аутоиммунным тиреоидитом 118
3.5. ROC-анализ диагностической ценности онкомаркеров 121
3.6. Обработка результатов исследования с целью нахождения логистической регрессионной модели, позволяющей определить наличие рака щитовидной железы у пациентов с неаутоиммунными заболеваниями данного
органа 130
Выводы 134
Список литературы 135
