Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Ядерная оболочка 12
1.1.1. Строение и белковый состав ядерной оболочки и ламины 12
1.1.2. Особенности организации ядерной оболочки клеток дрозофилы 16
1.2. Ядерные поровые комплексы 18
1.2.1. Ультраструктура ядерных поровых комплексов 18
1.2.2. Биохимический состав ядерных пор 21
1.2.3. Механизмы транспорта молекул через ядерную пору 25
1.3. Цитоплазматические поры пористых пластинок. Особенности распределения, структурная динамика и взаимосвязь с ядерными поровыми комплексами 28
1.3.1. Особенности распределения пористых пластинок в различных типах клеток и тканей 29
1.3.2. Биохимический состав пористых пластинок и цитоплазматических пор 31
1.4. Митотическая реорганизация ядерной оболочки и пористых пластинок 33
1.4.1. Характеристика основных этапов клеточного цикла 33
1.4.2. Механизм разборки ядерной оболочки 37
1.4.3. Механизм сборки ядерной оболочки 40
1.4.4. Особенности сборки-разборки ядерных пор in vitro и in vivo 41
1.4.5. Сборка-разборка цитоплазматических пор в условиях in vitro и в митозе in vivo 45
1.5 Ранние эмбрионы дрозофилы как удобная модель для сравнительного исследования ультраструктурной динамики ядерной оболочки и пористых пластинок in vivo 47
1.5.1. Характеристика раннего эмбрионального развития дрозофилы 47
1.5.2. Особенности регуляции клеточного цикла в раннем эмбриогенезе дрозофилы 50
Заключение 54
Глава 2. Материалы и методы 56
2.1. Характеристика использованных в работе лабораторных линий дрозофил 56
2.2. Получение эмбрионов дрозофилы на требуемой стадии развития 56
2.3. Фиксация и заливка эмбрионов для ультраструктурного анализа 56
2.4. Получение, окрашивание и исследование полутонких и ультратонких срезов 57
2.5. Определение цикла деления синцитиального эмбриона 58
2.6. Морфометрический анализ 58
2.7. Вестерн-блот и определение количества белка 61
2.8. Субклеточное фракционирование 62
2.9. Исследование фосфорилирования нуклеопорина р150 63
2.10. Микроинъекции и конфокальная микроскопия на живых эмбрионах дрозофилы 63
Глава 3. Результаты 66
3.1. Сходство и различие ультраструктурной организации ядерных и цитоплазматических пор на стадии интерфазы 66
3.2. Сравнительный анализ ядерных и цитоплазматических пор в процессе их сборки-разборки в митозе 66
3.3. Особенности строения и распределения пористых пластинок на разных стадиях синцитиального развития дрозофилы 78
3.3. Морфометрический анализ количественной динамики ядерных и цитоплазматических пор на разных стадиях эмбриогенеза дрозофилы 83
3.4. Сравнительное исследование относительного количества отдельных нуклеопоринов в эмбрионах дрозофилы на разных стадии эмбриогенеза 86
3.5. Анализ распределения нуклеопоринов в ядерной, мембранной и цитозольной фракциях, выделенных из эмбрионов дрозофилы 88
3.6. Исследование фосфорилирования белков ядерных пор на примере нуклеопорина р 150 91
3.7 Влияние изменения уровня митотических циклинов на процессы сборки-разборки ядерных и цитоплазматических пор 93
3.7.1. Исследование влияния микроинъекции циклогексимида в синцитиальные эмбрионы дрозофилы 94
3.7.2. Морфометрический анализ количества цитоплазматических пор в эмбрионах png-мутантов со сниженным уровнем циклинов 99
3.8. Исследование влияния инактивации cdkl в синцитиальных эмбрионах термочувствительных мутантов на процесс сборки-разборки ядерных и цитоплазматических пор 102
3.9. Изучение действия окадаевой кислоты на процесс сборки ядерных и цитоплазматических пор 105
3.10. Изучение влияния малой ГТФ-азы Ran на сборку ядерных и цитоплазматических пор 107
Глава 4. Обсуждение 111
4.1. Динамика формирования ядерных и цитоплазматических пор в процессе митоза и раннего эмбриогенеза дрозофилы 111
4.2. Исследование функции пористых пластинок в синцитиальных эмбрионах дрозофилы 112
4.3. Cdkl и белковые фосфатазы, чувствительные к окадаевой кислоте, являются ключевыми регуляторами сборки/разборки ядерных и цитоплазматических пор в митозе 114
4.4. Влияние Ran на сборку ядерных и цитоплазматических пор 121
4.5. Заключение 123
Выводы 125
Литература 126
