Введение
1. Введение 5
1.Процесс фибриллообразования 9
1.1 Актуальность проблемы 9
1.2 История изучения фибриллообразования 10
2. Искусственные белки 13
2.1 Дизайн и свойства искусственного белка альбебетина 13
2.2 Биологически активные производные альбебетина 17
2.2.1 Альбеферон (ABBI) - ABB с фрагментом l30LKEKKYSP137 человеческого интерферона-а2 19
2.2.2. ABB-df- ABB с фрагментом 4iTGENHR46 фактора дифференцировки HLDF клеток линии HL-60 промиелоцитарного лейкоза человека 20
3. Предфибриллярное или промежуточное состояние белка ..22
3.1 Общая характеристика расплавленной глобулы н ее роль в биологических процессах 22
3.2 Расплавленная глобула и фибриллообразование 24
4. Современные исследования фибриллообразования 25
4.1 Модели фибриллообразования 25
4.2 Исследование цитотоксичности предфибриллярных образований 31
3. Материалы и методы 35
3.1. Материалы 35
3.1.1 Штаммы Е. coli. 36
3.1.2 Питательные среды 36
3.2. Методы получения искусственных белков 37
3.2.1 Экспрессия генов гибридных белков 37
3.2.2 Выделение и очистка гибридных белков 38
3.2.3 Выделение и очистка целевых искусственных белков 39
3.3 Методы исследований амнлоидообразования искусственных белков 40
3.3.1 Метод флуоресцентного анализа 41
3.3.2 Метод атомно-с иловой микроскопии 41
3.3.3 Метод кругового дихроизма 44
3.3.4 Методы исследования цитотоксичной активности амилоидных структур ABB 44
4. Результаты 46
4.1. Сравнительный анализ кинетики амилоидообразования ABB и его производных 46
4.2 Влияние электростатических взаимодействий на амилоидообразование искусственных белков , 47
4.3 Влияние температуры и амилоидообразования на вторичную структуру искусственных белков 51
4.4 Модель фибриллогенеза искусственных белков. Полиморфизм амилоидных структур и пути их олигомеризации 53
4.5 Исследование цитотоксичности амилоидных структур ABB 60
5. Обсуждение 63
5.1 Роль электростатических взаимодействий в амилоидообразовании ABB 63
5.2. Предфибриллярное состояние белка 66
5.3. Модель фибриллогенеза белков de novo 68
5.4. Амилоидные структуры ABB и цитотоксичность 70
5.5. Заключение 72
Выводы 76
