Введение
1 Литературный обзор 10
1.1. Строение и основные функции роговицы 10
1.1.1 .Строение и функции эпителия роговицы 10
1.1.2.Строение и функции стромы роговицы 13
1.1.3. Строение и функции эндотелия роговицы 15
1.2. Взаимодействия между слоями роговицы 18
1.2.1. Эндотелиалыю-стромальные взаимодействия 19
1.2.2. Взаимодействия между стромой и эпителием роговицы 19
1.3. Процессы ранозаживления в роговице 27
1.3.1 Общая последовательность процессов, протекающих в ходе ранозаживления 27
1.3.2. Клеточные источники регенерации роговицы 29
1.3.3. Ранозаживление в эпителии роговицы 35
1.3.4. Процессы ранозаживления в строме роговицы 38
1.3.5. Процессы ранозаживления в эндотелии роговицы 45
1.4. Регуляторные белки, биологически активные в сверхмалых дозах 47
Глава 2 Материалы и методы 52
2.1. Приготовление экстракта ткани роговицы 52
2.2. Приготовление супернатанта экстракта ткани роговицы 52
2.3. Получение фракций экстракта ткани роговицы и супернатанта методом изоэлектрофокусирования 52
2.4. Определение концентрации белка 53
2.5. Электрофорез белков в полиакриламидиом геле 54
2.6. Обращешю-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) 55
2.7. Определение вторичной структуры с помощью метода кругового дихроизма 56
2.8. Исследование частиц в водном растворе РБР методом динамического светорассеяния 56
2.9. Определение радиуса частиц, присутствующих в растворе РБР, методом атомно-силовой микроскопии 59
2.10. Определение влияния растворов, содержащих РБР, на вязкоупругие свойства мембран гепатоцитов мышипри кратковременном органном культивировании in vitro 59
2.11. Получение кроличьей поликлоналыюй антисыворотки 60
2.12. Иммуноферментный анализ антител (ELISA) 60
2.13. Иммуногистохимическое исследование локализации белка с использованием F1TC -конъюгированных антител 62
2.14. Культивирование роговицы 63
2.15. Приготовление гистологических срезов 63
2.16. Нанесение разреза роговицы 66
2.17. Исследование клеточной пролиферации методом радиоавтографии 66
Глава 3. Результаты и их обсуждение 69
3.1. Выделение и очисткарегуляторных белков, выделенных из роговицы глаза быка...69
3.2. Биотестирование фракций РБРв процессе очистки 74
3.3. Исследование РБР- фракции методом кругового дихроизма 80
3.4. Исследование методами динамического светорассеяния и атомно-силовой микроскопии размеров и формы частиц, присутствующих в водном растворе регуляторного белка роговицы 81
3.5. Исследование локализации регуляторного белка, выделенного из роговицы глаза быка 89
3.6. Исследование влияния регуляторных белков, выделенных из роговицы глаза быка, на состояние роговицы тритона в условиях роллерного культивирования in vitro 93
3.7. Влияние С-РБР на состояние роговицы тритона при органном культивировании на подложке в условиях in vitro 106
3.8. Влияние С-РБР на состояние роговицы крысы при роллерном органном культивировании в условиях in vitro 113
3.9. Влияние С-РБР на состояние роговицы крысы в условиях культивирования на подложке in vitro 117
3.10. Исследование влияния С-РБР на клеточную пролиферацию эпителия роговицы тритона после нанесесения экспериментального разреза в условиях in vivo 121
Глава IV. Общее обсуждение 126
Выводы 134
Список литературы
