Введение
I. Обзор литературы 10
1.1. Краткая характеристика гистонов 10
1.1.1. Принципы выделения гистонов 10
1.1.2. Выделение отдельных фракций гистонов 11
1.2. Первичная структура гистонов , 12
1.2.1. Гистон HI 12
1.2.2. Гистоны нуклеосомного кора 14
1.2.2.1. Гистон Н2В 14
1.2.2.2. Гистон Н2А 15
1.2.2.3. Гистон Н4 16
1.2.2.4. Гистон НЗ 17
1.3. Гистон-гистоновые и ДЩС-гистоновые взаимодействия 17
1.4. Варианты гистонов 20
1.4.1. Вариабельность гистона HI 20
1.4.2. Варианты гистонов нуклеосомного кора 21
1.5. Модификации гистонов 24
1.5.1. Постсинтетическое ацетилирование гистонов . 27
1.5.2. Ферменты ацетилирования 28
1.5.3. Влияние бутирата натрия на функционирование клеточного ядра 29
1.5.4. Обмен ацетильных групп в гистонах 30
1.5.5. Ацетилирование гистонов во время клеточного цикла 32
1.5.6. Ацетилирование гистонов во время транскрипции 35
1.6. Раннее эмбриональное развитие как модель исследования структурно-функциональных особенностей хроматина 37
1.6.1. Стадии развития 37
1.6.2. Клеточный цикл в развитии 38
1.6.3. Транскрипционная активность хроматина . 41
2. Материалы и методы 45
2.1. Выращивание зародышей , 45
2.2. Инкубация зародышей с радиоактивными предшественниками 46
2.3. Выделение ядер и хроматина 47
2.3.1. Зародыши морского ежа 47
2.3.2. Спермин 48
2.3.3. Целомоциты 48
2.4. Выделение кислоторастворимых белков хроматина . 49
2.5. Выделение фракций гистонов 49
2.6. Фракционирование гистонов морского ежа методом гелъфильтрации 50
2.7. Фракционирование гистонов морского ежа методом электрофореза в полиакриламидном геле 51
2.7.1. Катионная система электрофореза, содержащая мочевину 51
2.7.2. Катионная система электрофореза, содержащая мочевину и тритон Х-100 52
2.7.3. Анионная система электрофореза, содержащая ДЦС натрия 53
2.8. Фракционирование гистонов при помощи двухмерных систем электрофореза 54
2.9. Определение радиоактивности белков 56
2.9.1. Высушивание полиакриламидных гелей . 56
2.9.2. Определение радиоактивности белков методом флуорографии и авторадиографии 56
3. Результаты и их обсуждение 58
3.1. Подбор оптимальных условий для фракционирования гистонов морского ежа Strongylocentrotus droeba-chiensis методом электрофореза 58
3.2. Гетерогенность гистонов в раннем развитии морского ежа Strongylocentrotus droebachiensis 66
3.2.1. Гистон HI 67
3.2.2. Гистоны нуклеосомного кора 75
3.2.2.1. Биосинтез гистона Н2В в раннем развитии морского ежа Strongylocentrotus droebachiensis 75
3.2.2.2. Биосинтез гистона Н2А в раннем развитии морского ежа Strongylocentrotus droeba chiensis 81
3.2.3. Сравнение гистонов клеток зародышей и дифференцированных клеток морского ежа Strongylo centrotus droebachiensis 91
3.3. Ацетилирование гистонов в раннем развитии морскогоежа Strongylocentrotus droebachiensis 95
3.3.1. Ацетилирование гистонов в раннем развитии во время первичной дифференцировки клеток 96
3.3.2. Ацетилирование новосинтезируемых гистонов 102
3.3.3. Динамика ацетилирования новосинтезированных молекул гистонов в хроматине 109
Заключение 124
Вывода 127
Литература 129
