Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Хитин 12
1.1.1. Распространение хитина в природе 12
1.1.2. Химическая природа и физико - химические свойства хитина 15
1.1.3. Получение хитина из природных источников 18
1.1.4. Биосинтез хитина 19
1.1.5. Биологическая активность хитина и его соединений 21
1.2. Хитиназы 23
1.2.1. Первые этапы изучения бактериальных хитиназ 23
1.2.2. Общие свойства хитиназ 24
1.2.3. Распространение хитиназ в природе 26
1.2.4. Выделение хитиназ 27
1.2.5. Измерение активности хитиназ 29
1.2.6. Строение и классификация хитиназ 31
1.2.7. Происхождение, классификация и строение растительных хитиназ 32
1.2.8. Происхождение, классификация и строение бактериальных хитиназ 36
1.2.9. Строение и каталитическая активность хитиназ 38
1.2.10. Регуляция активности генов хитиназ з
1.2.11. Хитиназы микроорганизмов рода Vibrio 41
1.2.12. Ингибиторы хитиназ 47
1.2.13. P-N-ацетилглюкозаминидазы (хитобиазы) и их свойства
1.2.14. Деацетилазы и их свойства
1.3. Применение хитина и хитиназ
1.4. Краткая характеристика бактериального рода Vibrio S7
Глава 2. Материалы и методы Я7
2.1. Среды и реактивы СП
2.2. Бактериальные штаммы СП
2.3. Определение концентрации Сахаров
2.4. Приготовление субстратов для ферментативных исследований...
2.5. Определение концентрации белка
2.6. Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ) в денатурирующих условиях
2.7. Измерение деацетилазной активности
2.8. Определение оптической плотности (ОП)
2.9. Приготовление сред для культивирования /ГН
2.10. Приготовление буферов
2.11. Тонкослойная хроматография (ТСХ) 70
2.12. Ионообменная хроматография 70
2.13. Гидрофобная хроматография 70
2.14. Гель-фильтрация 70
2.15. Культивирование микроорганизмов 71
2.16. Определение ферментативной активности 71
2.17. Определение фунгициднои активности 4
Глава 3. Экспериментальные результаты 72
3.1. Сравнение результатов, полученных при калибровке различных колориметрических методов определения концентрации Сахаров 72
3.2. Выбор способа измерения хитиназнои активности 73
3.3. Vibrio sp. X его выделение и идентификация хитиназнои активности 74
3.4. Таксономия и морфологические характеристики исследуемого штамма 76
3.5. Рост Vibrio sp. X на синтетической среде 78
3.6. Особенности культивирования Vibrio sp. X 79
3.7. Рост на крахмале и накопление амилазной активности 84
3.8. Деацетилазная активность 85
3.9. Рост на других субстратах 3.10. Устойчивость к антибиотикам 86
3.11. Получение ферментативного препарата 87
3.12. Анализ белков культуральнои жидкости Vibrio sp, X 88
3.13. Выделение хитиназы В 89
3.14. Выделение хитиназы А "3
3.15. Состав белков культуральнои жидкости при выращивании Vibrio sp. X на различных средах 95
3.16. Выделение хитиназ С и D ""
3.17. Свойства хитиназ Vibrio sp. X &2
3.17.1. Зависимости активности от температуры, рН и ионной силы среды 102
3.17.2. Влияние различных ионов на активность ферментов
3.17.3. Действие ферментов на различные субстраты Ю6
3.18. Анализ продуктов гидролиза хитина хитиназами Vibrio sp. X... Ю8
3.19. Совместное действие хитиназ И 3.20. Индукция хитиназного регулона И4
3.21. Фунгицидная активность Vibrio sp. X И6
3.22. Сравнение Vibrio sp. X с Serratia marcescens и оценка его перспектив как продуцента хитиназы 119
Глава 4. Обсуждение результатов 121
4.1. Сравнение выделенных хитиназ с другими хитиназами Vibrio 121
4.2. Изменение рН ростовой среды в процессе культивирования 123
4.3. Изменение спектра синтезируемых хитиназ с течением времени.. 125
4.4. Влияние начального рН ростовой среды на индукцию хитиназного комплекса Vibrio sp. X 127
4.5. Построение математической модели роста Vibrio sp. X и накопления ферментативной активности 129
4.6. Перспективы использования Vibrio sp. X как продуцента
хитиназы 133
Заключение 135
Выводы 136
Список литературы
