Введение
2. Обзор литературы 8
2.1 Апоптоз - запрограммированная клеточная смерть 8
2.1.1 Молекулярные механизмы апоптоза 10
Каспазы 10
Семейство белков Bcl-2 12
2.1.2 Внешний путь развития апоптоза 13
2.1.3 Внутренний (митохондриальный) путь развития апоптоза 15
2.2. Ингибиторы апоптоза 17
2.3. Сурвивин 18
2.3.1 Структура сурвивина 19
2.3.2 Экспрессия гена BIRC5 21
2.3.3 Биологические активности сурвивина 21
Ингибирование апоптоза 21
Роль сурвивина в митотическом делении клетки 22
Влияние сурвивина на ангиогенез 23
2.4. PML - (promyelocytic leukemia gene - ген промиелоцитарной лейкемии) 24
2.4.1 Структура гена PML и классификация изоформмРНК 25
2.4.2 Доменная структура белка PML, характеристика его изоформ и компартментализации в клетке 27
2.4.3 Экспрессия гена PML 29
2.4.4 Биологические активности PML 31
РML - регулятор экспрессии генов 31
Супрессия клеточного роста и проапоптотическая активность PML 32
Противовирусная активность PML 35
2.5. SMAC/DIABLO (Second Mitohondria-derived Activator of Caspases) 36
2.5.1 Структура SMAC/DIABLO 37
2.5.2 Экспрессия гена SMAC/DIABLO 37
2.5.3 Проапоптотическая активность SMAC/DIABLO 38
2.6 Заключение 40
3. Материалы и методы 41
3.1. Материалы 41
3.2 Методы 48
4. Результаты и их обсуждение 58
4.1.Введение 58
4.2. Анализ экспрессии гена BIRC5 и генов его ингибиторов SMAC и PML 58
Анализ экспрессии генов BIRC5, SMAC и PML в опухолевых и нормальных тканях
человека при немелкоклеточном раке легкого и плоскоклеточном раке пищевода 58
Анализ экспрессии генов BIRC5, SMAC и PML в опухолевых клеточных линиях человека 66
4.2. Создание экспрессионных генно-инженерных конструкций, содержащих гены SMAC и PML 69
4.3. Получение клеточных линий А549, HeLa, Calul и NCI-H358, стабильно экспрессирующих SMAC и PML 72
4.4. Анализ эффекта экспрессии гена PML в условиях транзиентной трансфекции клеток линий HeLa, А549 и НТ1080 плазмидой pEGFP-N1-PML1 75
4.5. Анализ влияния повышенной экспрессии С-концевого фрагмента PML1 на активность промотора гена BIRC5 78
4.6 Анализ чувствительности к противоопухолевому препарату цисплатину клеток линий А549, Hela, Calu-1 и NCI-H358 80
4.7 Анализ влияния стабильной экспрессии гена SMAC на клеточную пролиферацию и чувствительность к противоопухолевому препарату
цисплатину клеток линий А549, HeLa, Calu-1 и NCI-H358 82
4.8. Заключение 84
5. Выводы 86
Список цитируемой литературы
