Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1. Применение нитроксильных радикалов как спиновых зондов 14
1.2. Механизм восстановления нитроксильных радикалов аскорбиновой кислотой
1.3. Влияние структуры и свойств ННР на их стабильность по отношению к восстановлению в биологических средах
1.4. Применение циклодекстринов для модификации нитроксильных радикалов
1.5. Применение нитроксильных и тритильных радикалов 21
как спиновых меток в структурной биологии
1.6. Экспериментальные методы исследования — ЭПР, PELDOR, DEER 22
1.7. Применение нитроксильных радикалов как спиновых меток для исследования структуры и функций белков
1.8. Применение тритильных радикалов как спиновых зондов для оксиметрии
1.9. Спиновые метки на основе триарилметильных радикалов 1.10. Применение нитронилнитроксильных радикалов 36
как спиновых зондов оксида азота (II)
1.12. Постановка задачи 40
Глава 2. Исследование возможности применения нитронилнитроксильных радикалов в качестве спиновых зондов в ЭПР-томографии in vivo
2.1. Введение 43
2.2. Исследование магнитно-резонансных параметров 45
2.3. Восстановление радикалов аскорбатом 45
2.4. Восстановление радикалов в крови крыс и ее компонентах 47
2.5. ЭПР-томография мышей с применением в качестве 49
спинового зонда ННР in vivo
2.6. Влияние оксида азота (II) на фармакокинетику NN1 51
2.7. МРТ мышей после введения NN1 54
2.8. Функциональные свойства нитронилнитроксильных радикалов, 55
ковалентно-связанных с перметил--циклодекстрином. Тип равновесия в аддукте ННР и ЦД
2.9. Чувствительность аддукта к оксиду азота (II) 59
2.10. Стабильность аддукта по отношению к восстановлению 60
2.11. Заключение
Глава 3. Исследование функциональных свойств 2,5-бис(спироциклогексил)- замещенных нитроксильных радикалов пирролинового и пирролидинового рядов
3.1. Введение 63
3.2. Исследование магнитно-резонансных параметров 65
3.3. Исследование липофильности 68
3.4. Восстановление нитроксильных радикалов аскорбатом 68
3.5. Релаксация спирозамещенных радикалов в матрице трегалозы 71
при комнатной температуре
3.6. Температурная зависимость Tm и T1 для свободных 75
нитроксильных радикалов в трегалозе
3.7. Моделирование ЭПР спектров в Х-диапазоне при Т=300 K 79
3.8. Времена релаксации нитроксильных радикалов, 81
ковалентно связанных с ДНК, при комнатной температуре в матрице трегалозы 3.9. Заключение 82
Глава 4. Исследование магнитно-резонансных и функциональных свойств тритильных радикалов
4.1. Введение 84
4.2. Магнитно-резонансные параметры 85
4.3. Гидролиз тритильных радикалов dAMT 88
4.4. Зависимость спектра dMET от pH 90
4.5. Заключение 91
Глава 5. Материалы и методы 92
5.1. Реагенты 92
5.1.1. Коммерческие реагенты 92
5.1.2. Некоммерческие реагенты
5.2. Определение коэффициентов разделения 92
5.3. Иммобилизация нитроксильных радикалов в трегалозе 93
5.4. Измерения ESEEM 93
5.5. Измерения релаксации 94
5.6. Измерения стационарных спектров ЭПР
5.6.1. В главе 2 94
5.6.2. В главе 3 94
5.6.3. В главе
5.7. Процедура «заморозка — откачка» 95
5.8. ЭПР-томография в L-диапазоне in vivo. 95
5.9. Измерение стабильности радикалов 96
5.9.1. Восстановление ННР и ИНР аскорбиновой кислотой (глава 2)
5.9.2. Восстановление нитроксильных радикалов в крови 96
крыс и ее компонентах (глава 2)
5.9.3. Восстановление аддукта ННР с ЦД 97
аскорбиновой кислотой (глава 2)
5.9.4. Восстановление радикалов аскорбиновой кислотой (глава 3) 97
5.10. Исследование реакции радикалов с оксидом азота. 97
Основные результаты и выводы 99
Список используемых обозначений 100
Список используемой литературы 101
Список публикаций по теме диссертации 119
Благодарности
