Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Микросомальная монооксигеназная система в метаболизме экзогенных и эндогенных соединений
1.1.1. Цитохром Р450 - ключевой компонент микросомальной монооксигеназной системы
1.1.2. Множественные формы цитохромов Р450 15
1.1.3. Феномен индукции цитохромов Р450 18
1.1.3.1. Индукторы цитохромов Р450 20
1.1.3.2. Молекулярные механизмы индукции цитохромов Р450 20
1.2. Характеристика цитохромов Р450 подсемейства 23
1.2.1. Субстратная специфичность СYP1А1 иСУР1А2 26
1.2.2. Регуляция экспрессии гена цитохрома Р450 1А1 27
1.2.2.1. Индукция цитохрома Р450 1А1 полициклическими ароматическими ? углеводородами
1.2.2.2. Неклассические индукторы CYP1A1 32
1.2.2.3. Негативная регуляция CYP1A1 35
1.2.3. Регуляция экспрессии гена цитохрома Р450 1А2 37
1.2.4. Роль физиологических факторов в индукции CYP1А 40
1.2.4.1. Эндогенные индукторы СYP1А 40
1.2.4.2. Старение и стресс: влияние на регуляцию экспрессии CYP1А 43
1.2.5. Межлинейные различия в активности CYP1А у мышей 45
Заключение 47
ГЛАВА 2. Материалы и методы 48
2.1. Материалы 48
2.2. Животные 49
2.3. Методы исследования 49
2.3.1. Индукция CYP1А в микросомах печени мышей 49
2.3.2. Воздействие на животных иммобилизационным стрессом 49
2.3.3. Выделение микросом печени мышей 50
2.3.4. Определение концентрации белка в микросомах 50
2.3.5. Определение общего содержания цитохрома Р450 в микросомах печени 51
2.3.6. Вертикальный электрофорез белков в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях
2.3.7. Полусухой электроперенос белков на нитроцеллюлозную мембрану 51
2.3.8. Иммунохимический анализ белков микросом 52
2.3.9. Определение ферментативной активности CYP1A1 HCYP1A2 52
2.3.10. Получение препаратов суммарной РНК из клеток печени мышей 53
2.3.11. Электрофорез РНК в частично денатурирующих условиях 53
2.3.12. Определение концентрации РНК в образце 54
2.3.13. Реакция обратной транскрипции 54
2.3.14. Мультиплексная полимеразная цепная реакция (ПЦР) 55
2.3.15. Анализ продуктов ПЦР 56
2.3.16. Получение препаратов геномной ДНК 57
2.3.17. Секвенирование продуктов ПЦР 57
2.3.18. Статистическая обработка данных 58
ГЛАВА 3. Результаты 59
3.1. Индукция CYP1A1 и CYP1A2 в печени инбредных линий мышей, обработанных 3-метилхолантреном (MX) и о-аминоазотолуолом (О AT)
3.1.1. Иммунохимический анализ микросомал ьных белков С YP1А1 и С YP1А2 59
3.1.2. Ферментативная активность CYP1A1 и CYP1A2 в печени мышей 61
3.1.3. Уровень экспрессии генов CYP1A1,CYP1A2, AhR и ARNT 63
3.1.3.1. Исследование экспрессии генов CYP1A1, CYP1A2, AhR и ARNT в зависимости от времени после введения MX в качестве индуктора
3.1.3.2. Содержание мРНК цитохромов Р450 1А1 и 1А2 в печени мышей 67
3.1.3.3. Содержание мРНК AhR и ARNT в печени мышей при индукции MX 69
3.2. Сравнительный анализ регуляторной последовательности гена CYP1A2 „. (от -4675 до -4204) у мышей инбредных линий
3.3. Влияние стресса на индукцию цитохрома Р4501А 74
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 78
Заключение 92
Выводы 94
Список литературы
