Введение
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 9
1.1. Состав, функция и физико-химические свойства крови млекопитающих
Общие положения 9
Морфология и функция форменных элементов крови 12
Основные функции крови 14
1.2. Белки сыворотки крови 15
1.3. Биологически активный в сверхмалых дозах регуляторный белок, з2 выделенный из сыворотки крови млекопитающих
1.4. Цитокины 42
1.5. Цитомедины 44
1.6. Белки S100 47
ГЛАВА 2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 49
2.1. Использованные материалы 49
2.2. Методы, примененные при выполнении работы 50
Получение фракций РБ из сыворотки крови млекопитающих 50
Обработка слабокислого регуляторного белка серным эфиром 51
Определение концентрации регуляторных белков 52
Масс-спектрометрия 52
Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) 53
Электрофорез в полиакриламидном геле 53
Исследование регуляторных белков с помощью ядерного магнитного с г резонанса (ЯМР)
Спектры кругового дихроизма 55
Дифференциальная сканирующая калориметрия 56
Биотестирование фракций белков, полученных в процессе очистки, 57
для определения присутствия регуляторных белков
Определение состояния регуляторных белков в растворах методом 58
АСМ (атомно-силовой микроскопии)
Получение поликлональной антисыворотки 58
Роллерное органное культивирование кожи тритонов Pleurodeles waltl 59
Изучение влияния сывороточного регуляторного белка на ранозаживление в коже у млекопитающих in vivo Изучение белка-инактиватора 61
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 65
3.1. Выделение и очистка регуляторных белков, выделенных изсыворотки крови КРС 55
3.2. Биотестирование фракций регуляторных белков в процессе очистки 68
Исследование мембранотропной активности РБ, выделенных из сыворотки крови млекопитающих
3.3. Исследование физико-химических свойств регуляторных белков, выделенных из сыворотки крови млекопитающих 92
Оценка значения «кажущейся» молекулярной массы регуляторных белков 92
Изучение вторичной структуры РБ с помощью метода кругового дихроизма 95
Изучение растворов РБ с помощью метода атомно-силовой микроскопии
Исследование РБ, выделенных из сыворотки крови млекопитающих, с помощью высокоэффективной э/сидкостной хроматографии Ю5
Исследование состава фракций регуляторных белков с помощью
ядерного магнитного резонанса 108
Изучение липидной компоненты фракции СРБ 110
Исследование КРБ с помощью метода масс-спектрометрии Electrospray
3.4. Изучение локализации в тканях позвоночных животных, а также специфической биологической активности регуляторных белков сыворотки крови 112
Исследование локализации СРБ в печени тритона Pleurodeles waltl 112
Исследование влияния РБ на состояние ткани кожи тритона Pleurodeles waltl при органном культивировании in vitro
Исследование влияния слабокислого регуляторного белка на ранозаживление кожи мыши in vivo
3.5. Исследование белка, инактивирующего мембранотропное действие СРБ 12U
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 131
ВЫВОДЫ 132
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 134
