Введение
Глава 1. Обзор литературы 16
1.1. Туберкулёз: особенности патогенеза и иммунного ответа 16
1.1.1. Первичное заражение клеток хозяина 16
1.1.2. Т-клеточный ответ 20
1.1.3. Туберкулёзная гранулёма 21
1.2. Разнообразие В-лимфоцитов 23
1.2.1. Лимфоциты В1 23
1.2.2. Лимфоциты В2 25
1.2.3. Плазмобласты и плазматические клетки 26
1.2.4 Регуляторные В-клетки 26
1.3. В-клетки в ответе на микобактерии и другие внутриклеточные патогены 27
1.3.1. Влияние В-лимфоцитов и антител на другие клетки иммунной системы при туберкулёзе 27
1.3.2. Антитела и внутриклеточные патогены 31
1.3.3. Роль антител, выработанных при ответе на заражение микобактериями 33
1.3.4. Цитокины В-лимфоцитов 35
1.3.5. В-клеточные фолликулы (третичные лимфоидные органы) 37
Глава 2. Материалы и методы 40
2.1 Лабораторные животные 40
2.2 Культуры микобактерий 40
2.3 Заражение животных 41
2.4 Определение количества микобактерий в органах заражённых животных 42
2.5 Антигены 42
2.6 Среды и растворы 43
2.7 Получение суспензии клеток лёгкого 44
2.8 Получение лёгочных В-лимфоцитов 45
2.9 Получение суспензии клеток селезёнки и В-клеток из селезёнки, плевральной полости и лимфоузлов 45
2.10 Получение лёгочных макрофагов 45
2.11 Измерение количества NO, производимого лёгочными макрофагами 46
2.12 Определение активности аргиназы 47
2.13 Выделение РНК и получение кДНК 47
2.14 Полимеразная цепная реакция в реальном времени 47
2.15 Приготовление гистологических срезов и планиметрия 48
2.16 Иммунохимическая окраска срезов 49
2.17 Иммунофлуоресцентная окраска срезов 50
2.18 Проточная цитофлуориметрия 50
2.19 Определение антител, производимых лёгочными В-лимфоцитами в культуре 51
2.20 Создание гибридом и анализ антител 52
2.21 Продукция цитокинов лёгочными В-лимфоцитами 52
2.22 Оценка антиген-представляющей функции В-лимфоцитов 52
2.23 Статистическая обработка результатов 53
Глава 3. Результаты и обсуждение 54
3.1 При туберкулёзе В-клетки накапливаются в лёгких и формируют в них В-клеточные фолликулы 54
3.2 В- и Т-лимфоциты пролиферируют в фолликулах 56
3.3 Характеристика поверхностного фенотипа В-лимфоцитов 59
3.3.1 Общая характеристика 59
3.3.2 Лёгочные лимфоциты В2 не несут маркёра CD23 62
3.4 В-лимфоциты способствуют частичной поляризации макрофагов по пути М2 68
3.5 Функциональная характеристика лёгочных В-клеток 75
3.5.1 Лёгочные В-лимфоциты производят провоспалительные IL-6 и IL-11 и не производят классических про- (TNF- и IFN-) и противовоспалительных (IL-10 и TGF-) цитокинов 76
3.5.2 Лёгочные В-лимфоциты способны эффективно выполнять роль АПК 79
3.5.3 Исследование антител, производимых лёгочными В-лимфоцитами 82
Глава 4. Заключение 90
Выводы 95
Список сокращений 97
Список литературы 101
