Введение
Глава 1. Теоретические основы изучения роли моноцитов с онкогенной мутацией JAK2 V617F в развитии фиброза костного мозга при миелопролиферативных неоплазиях 15
1.1. Современные представления о механизмах миелофиброза 15
1.1.1. Патогенез миелофиброза 15
1.1.2. Роль JAK2 V617F 17
1.2. Модели для изучения миелофиброза 22
1.2.1. TPOhigh модели 22
1.2.2. GATA-1low модель 25
1.2.3. JAK2 V617F–модель 27
1.2.4. MPL W515L-модель 28
1.3. Роль макрофагов в развитии фиброза 30
1.4. Молекулярные механизмы возникновения и развития миелофиброза 32
1.4.1. Металлопротеиназы и их ингибиторы в развитии миелофиброза 32
1.4.2. Ростовые факторы в развитии миелофиброза 33
1.4.3. Галектин-3 в развитии миелофиброза 37
1.4.4. Пентраксин-3 в развитии миелофиброза 38
1.5. Лабораторная диагностика миелофиброза 40
1.5.1. Гематологические показатели 40
1.5.2. Кариотипические изменения 41
1.5.3. Молекулярная диагностика 41
1.5.4. Биохимические показатели 42
Глава 2. Материалы и методы 43
2.1. Экспериментальная работа с культурой клеток 43
2.1.1. Создание трансгенной клеточной линии 43
2.1.2 Секвенирование по Сэнгеру 44
2.1.3. Культуральные методы 46
2.1.4. Проточная цитофлуориметрия 48
2.1.5. Анализ молекулярно-генетического профиля и кондиционированных сред от клеточных линий 49
2.2. Исследование материала от пациентов 53
2.2.1 Взятие образцов и отбор пациентов для исследования 53
2.2.2 Исследование мутационного статуса 53
2.2.3. Исследование факторов, участвующих в развитии фиброза костного мозга 56
2.3. Статистическая обработка данных 56
Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение 58
3.1. Механизмы активации макрофагов под влиянием активации JAK-STAT пути 58
3.1.1. Характеристика полученных линий после трансдукции 58
3.1.2. Оценка количества живых клеток 59
3.1.3. Экспрессия макрофагами с активированным и неактивированным JAK2 металлопротеиназ и их ингибиторов при культивировании в различных условиях 60
3.1.4. Уровень экспрессии макрофагами с активированным и неактивированным JAK2 ростовых факторов, пентраксина-3 и галектина-3 при культивировании в различных условиях 66
3.1.5. Содержание TGFb, VEGF и ММП-9 в кондиционированных средах от макрофагов с активированным и неактивированным JAK2 в различных условиях культивирования 70
3.1.6 Зависимость эффектов человеческого тромболизата на макрофаги от активности Янус-киназы 72
3.1.7. Влияние сывороточного амилоида А на эффект человеческого тромболизата 73
3.2. Обследование пациентов с МПН 75
3.2.1. Характеристика обследованных пациентов 75
3.2.2. Уровень матриксных металлопротеиназ в сыворотке пациентов с МПН 76
3.2.3. Уровень ростовых факторов в сыворотке пациентов с МПН 77
3.2.4. Уровень галектина-3 в сыворотке пациентов с МПН 79
3.3. Создание лабораторного алгоритма дифференциальной диагностики миелопролиферативных неоплазий 81
3.3.1. Определение уровня ММП-9 и галектина-3 в сыворотке крови для дифференциальной диагностики эссенциальной тромбоцитемии и первичного миелофиброза 81
3.3.2. Клинический случай 84
Заключение 86
Выводы 90
Практические рекомендации 92
Перспективы дальнейшей разработки темы 93
Список сокращений 94
Литература 95
