Введение
Глава 1. Обзор литературы 15
1.1. 1.1 Биологические особенности хламидий .15
1.2. 1.1.1 Жизненный цикл хламидий 15
1.3. 1.1.2 Структура клеточной оболочки хламидий 17
1.4. 1.1.3 Система секреции III типа хламидий .19
1.5. 1.2 Эпидемиология хламидийной инфекции 23
1.3 Стратегии контроля распространения хламидийной инфекции: лечение или профилактика? .26
1.4 Преимущества вакцинации, как стратегии контроля над распространением хламидийной инфекции 27
1.5 Особенности патогенеза хламидийной инфекции..
1.5.1 Клеточная парадигма .31
1.5.2 Иммунологическая парадигма 34
1.6. 1.6 Характеристика иммунного ответа при хламидийной инфекции... 37
1.6.1 Врожденная резистентность 38
1.6.2 Адаптивный иммунный ответ .41
1.7. 1.7 Исследования по разработке вакцин против хламидиоза 42
1.7.1 Аттенуированные хламидийные вакцины .42
1.7.2 Субъединичные вакцины .43
1.7.3 Генетические вакцины 46
1.7.4 Адъюванты, используемые в разработке вакцин против хламидиоза 48
1.7. 1.8 Состояния и перспективы разработки вакцины против урогенитального хламидиоза, вызванного C. trachomatis 51
Глава 2. Собственные исследования 54
2.1 Материалы 54
2.1.1 Бактериальные штаммы .54
2.1.2 Клеточные линии.. 54
2.1.3 Антигены 54
2.1.4 Плазмидные векторы 54
2.1.5 Адъюванты 55
2.1.6 Другие реактивы 55
2.1.7 Лабораторные животные 56
2.1.8 Лабораторное оборудование .56
2.2 Методы исследования 57
2.2.1 Методы работы с животными 57
2.2.2 Методы мониторинга инфекционного процесса .63
2.2.3 Методы иммуномониторинга вакцинных конструкций .63
2.2.4 Статистическая обработка результатов исследований 69
2.3 Результаты исследований .70
2.3.1 Изучение иммуногенных и протективных свойств рекомбинантного аденовирусного вектора, экспрессирующего белок OmcB C. trachomatis 70
2.3.1.1 Получение рекомбинантного аденовируса, несущего ген оmcB C. trachomatis 70
2.3.1.2 Изучение иммуногенных и протективных свойств Ad-mOmcB-Fc на
модели урогенитальной хламидийной инфекции, вызванной C. muridarum 73
2.3.2 Характеристика иммуногенных свойств структурного белка третьей
транспортной системы хламидий TC 0037 80
2.3.2.1 Определение специфических антител к рекомбинантному белку TC 0037 C. muridarum (rC 0037) и его эпитопу - пептиду TC 0037 (pC 0037) методом ИФА 81
2.3.2.2 Анализ специфической лимфопролиферации в ответ на антиген TC 0037 C. muridarum 82
2.3.2.3 Анализ реакции торможения миграции макрофагов (РТММ),
полученных от мышей, иммунизированных белком TC 0037 C. muridarum 84
2.3.2.4 Адаптивный перенос Т-клеток от мышей, иммунизированных антигеном TC 0037 C. muridarum 86
2.3.3 Сравнительный анализ иммуногенных и протективных свойств генетических конструкций на основе аденовирусного вектора, экспрессирующих белки хламидий OmcB и TC 0037 (Ad-mOmcB-Fc/Ad-MBLC 0037) 89
2.3.3.1 Получение рекомбинантного аденовируса, несущего ген tc 0037 (Ad MBLC 037) C. muridarum 89
2.3.3.2 Изучение иммуногенных и протективных свойств препаратов Ad mOmcB-Fc, Ad-MBLC 0037 на модели урогенитальной хламидийной инфекции, вызванной C. muridarum .90
2.3.4 Оптимизация схемы иммунизации генетической конструкцией на основе аденовирусного вектора, экспрессирующего белок TC 0037 C. muridarum 98
2.3.4.1 Изучение гуморального иммунного ответа на иммунизации Ad-MBL TC 0037 с бустированием рекомбинантным белком TC 0037 в сочетании с монофосфорил липидом А (rTC 0037-MPLA) 99
2.3.4.2 Оценка клеточного иммунного ответа к антигену TC 0037 у лабораторных животных, интраназально иммунизированных Ad-MBLC 0037 с бустированием rTC 0037-MPLA 101
2.3.4.3 Изучение протективных свойств иммунизации генетической конструкцией на основе аденовирусного вектора, экспрессирующего белок TC 0037 C. muridarum с бустированием rTC 0037-MPLA 104
Глава 3. Обсуждение результатов 113
Выводы .124
Список литературы
