Введение
I. Обзор литературы 11
1.1. Структурные белки хрусталика и системы поддержания их нативности 11
1.1.1. Особенности строения и функции хрусталика 11
1.1.2. Р-, у- и сс-кристаллины 13
1.1.3. Шаперон-подобная активность а-кристаллина 18
1.2. Повреждения и агрегация кристаллннов как первичный механизм катарактогенеза 22
1.3. Короткоцепочечные пептиды и их антикатарактальное действие 32
II. Материалы и методы исследования 39
II.З. Исследование полипептидного состава кристаллннов методом ПААГ- электрофореза 44
II.4. Индукция ультрафиолетовой и тепловой агрегации pL-кристаллина и смесей ее- и рь-кристаллинов 45
II.5. Метод анализа экспериментальных кривых агрегации 48
II.6. Определение количества карбонильных групп в Рь-кристаллине 50
II.7. Исследования растворов кристаллннов методом динамического лазерного светорассеяния (ДЛС). 50
II.8. Триптофановая флуоресценция. 52
III. Результаты исследования и обсуждение 53
III.1. Характеристика моделей агрегации кристаллннов 53
III. 1.1 Тепловая агрегация 54
III. 1.1.1 . Анализ кинетических кривых тепловой агрегации Д-кристаллина 54
III. 1.1.2. Кинетика тепловой агрегации Рь-кристаллина в присутствии а-кристаллина 57
Ш. 1.1.3. Механизм шаперон-подобной активности а-кристаллина при тепловой агрегации Рь-кристаллина 60
III. 1.2. УФ-индуцированная агрегация 64
III. 1.2.1. Анализ кинетических кривых УФ-агрегации /%,-кристаллина 64
III. 1.2.2. Кинетика УФ-агрегации Рь-кристаллина в присутствии яг-кристаллина 67
III. 1.2.3. Оценка "экранирующего эффекта" в защитном действии ог-кристаллина 70
III. 1.2.4. УФ-повреждения рь- и ог-кристаллинов 73
III. 1.2.5 . Усиление шаперон-подобного действия or-кристаллина под влиянием УФ- облучения 81
III. 1.2.6. Разделение во времени процессов УФ-повреждения и агрегации кристалл инов 88
III.2. Изучение взаимодействия короткоцепочечных пептидов с кристаллинами 92
III.2.1. Влияние короткоцепочечных пептидов на кинетику УФ-агрегации pL- кристаллина 92
III.2.2. Влияние короткоцепочечных пептидов на разделенную УФ-агрегацию рь-кристаллина 97
III.2.3. Влияние короткоцепочечных пептидов на кинетику тепловой агрегации PL- кристаллина 100
III.2.4. Влияние короткоцепочечных пептидов на количество карбонильных групп в pL-кристаллине при УФ-облучении 103
III.2.5. Влияние короткоцепочечных пептидов на размеры частиц Рь-кристаллина при УФ-облучении 105
III.2.6. Исследование действия КЦП на УФ-агрегацию смеси а- и Рь-кристаллинов 111
III.2.7. Влияние пантетина на размеры а-кристаллина 115
Заключение 118
Выводы 120
Список цитируемой литературы 122
