Введение
1. Озор литературы 10
1.1. Макрофаги 10
1.1.1. Морфологические особенности и молекулярногенетическая организация макрофагов 10
1.1.2. Реактивность макрофагов как механизм, регулирующий воспаление 13
1.2 Апоптоз и некроз - две формы гибели клетки 17
1.3. Роль липидов в апоптозе и некрозе 25
1.3.1. Липидыядра 25
1.3.2. Роль липидов в рецепции и внутриклеточной сигнализации. 28
1.3.3. Перекисное окисление липидов и его роль в реализации рограммы апоптоза и некроза 33
1.4. Роль липополисахаридов, активных форм кислорода и ме иаторов воспаления в апоптозе и некрозе макрофагов 37
2. Мтериалы и методы 43
2.1. Материалы 43
2.2. Методы 43
2.2.1 Объект исследования 43
2.2.2. Получение перитонеальных макрофагов 44
2.2.2.1.Постановка эксперимента 44
2.2.3. Выделение ядер ПМФ 45
2.2.4. Определение жизнеспособности клеток 45
2.2.5. Экстракция липидов из ПМФ и их ядер 46
2.2.6. Определение диеновых, триеновых коньюгатов и малоно ого диальдегида в ПМФ и их ядрах. 46
2.2.7. Фракционирование липидов в тонких слоях силикагеля и их количественное определение 47
2.2.8. Определение активности СОД и каталазы в ПМФ и их ядрах 49
2.2.9. Определение концентрации общего белка в ПМФ и их ядрах 50
2.3. Выделение и электрофорез ДНК макрофагов в агарозномеле 51
2.3.1. Приготовление агарозного геля 52
2.3.2. Определение концентрации ДНК 53
2.3.3. Световая и флуоресцентная микроскопия ПМФ 53
2.3.4. Окрашивание по Паппенгейму-Крюкову 54
2.3.5. Окрашивание акридиновым оранжевым. 54
2.3.6. ОкрашиваниеHoechst33258 55
2.3.7. Статистическая обработка данных 55
3. Рзультаты исследований 56
3.1 Влияние перекиси водорода и ЛПС Е. coli на гибель перионеальных макрофагов 56
3.2. Влияние перекиси водорода и ЛПС Е. coli на спектр липидов перитонеальных макрофагов и их ядер 65
3.3. Изменение окисленности липидов при Н2О2 и ЛПС Е..coli — индуцируемой гибели ПМФ 75
3.4. Влияние Н2Ог и ЛПС Е. coli на активность некоторых анти-оксидантых ферментов 82
3.5. Влияние модификаторов фосфоинозитидного цикла на гибель перитонеальных макрофагов 88
3.6. Влияние модификаторов Са -проницаемости на Н2О2-индуцированный апоптоз перитонеальных макрофагов 93
4. Осуждение 97
Вводы 108
Сисок литературы 110
