Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1 Фотодинамическая терапия 11
1.1.1 Механизм действия фотодинамической терапии 11
1.1.2 Фотосенсибилизаторы. Радахлорин и фотосенс 13
1.1.3 Применение ФДТ. Лечение опухолей мозга 15
1.2 Митохондрии и окислительный стресс 18
1.2.1 Основные биоэнергетические процессы 18
1.2.2 Окислительный стресс 23
1.2.3 Система антиоксидантной защиты клетки 27
1.2.4 Факторы транскрипции, активирующиеся в ответ на окислительный стресс 29
1.2.5 Митохондрии и гибель клетки 32
1.3 Клеточные механизмы повреждения ткани при ФДТ 34
1.3.1 Генерация АФК при ФД воздействии 34
1.3.2 Клеточные мишени ФДТ 36
1.3.3 Повреждение митохондрий при ФД воздействии 38
1.3.4 Роль факторов транскрипции NF-kB, AP-1 и HIF-1 при ФД
воздействии 39
1.3.5 Фотоиндуцированная клеточная гибель 41
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 43
2.1 Объекты исследования 43
2.2 Химические реактивы и оборудование 43
2.3 Культура клеток 45
2.4 Схема эксперимента с фотодинамическим воздействием на культуру клеток 46
2.5 Схема эксперимента с фотодинамическим воздействием на МРН 47
2.6 Определение изменений концентрации внутриклеточного кальция 48
2.7 Измерение скорости продукции супероксид-аниона 48
2.8 Метод регистрации аутофлуоресценции НАД(Ф)Н 50
2.9 Определение митохондриального потенциала
2.10 Метод определения содержания восстановленного глутатиона 55
2.11 Метод определения скорости перекисного окисления липидов 56
2.12 Обработка изображений и статистический анализ 56
ГЛАВА 3. Результаты исследований 59
3.1 Изменение концентрации внутриклеточного кальция при фотодинамическом воздействии радахлорина 59
3.2 Изменение продукции супероксид-аниона при ФД воздействии радахлорина 62
3.3 Исследование уровня восстановленного глутатиона в клетках при ФД воздействии радахлорина с помощью монохлорбимана 65
3.4 Исследование перекисного окисления липидов в клетках при ФД воздействии радахлорина с помощью C11 BODIPY [581/591] 65
3.5 Исследование биоэнергетического статуса клеток при ФД воздействии радахлорина по аутофлуоресценции НАД(Ф)Н 68
3.6 Исследование изменения митохондриального потенциала клеток при ФД воздействии радахлорина с помощью родамина 123 79
3.7 Влияние модуляторов NF-kB, АР-1 и HIF-1 на выживаемость клеток при фотодинамическом воздействии фотосенса 82
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 89
4.1 Фотоиндуцированный окислительный стресс в нейронах и глиальных клетках 89
4.2 Повреждение митохондрий при ФД воздействии радахлорина 91
4.3 Участие факторов транскрипции NF-B, АР-1 и HIF-1 в гибели нейронов и глиальных клеток при ФД воздействии 94
Заключение 99
Выводы 102
Список литературы
