Введение
Обзор литературы 9
Фрагментация и слияние митохондрий 9
Белковый аппарат фрагментации митохондриального ретикулума 10
Drpl - основной компонент аппарата фрагментации митохондрий 10
Fisl -адапторная молекула 12
Другие белки, участвующие в фрагментации митохондрий 13
Механизм фрагментации митохондрий 14
Белковый аппарат слияния митохондрий 15
ОРА1 - белок внутренней мембраны митохондрий 15
МитофузиньїМтІ и Mfh2 - многофункциональные белки 17
Фрагментация митохондрий при клеточном делении 20
Фрагментация митохондрий при апоптозе 21
Сигнальные механизмы, регулирующие фрагментацию митохондрий при апоптозе 23
Фрагментация митохондрий и механизм выхода цитохрома С в цитоплазму при апоптозе 26
Изменение структуры митохондриальных крист 26
Пермеабилизация внешней митохондриальной мембраны 27
Участие митохондриальной поры в процессе выхода цитохрома С из митохондрий 27
Комплекс «митохондриальной поры» и фрагментация митохондрий 32
Участие белков Вах и Вак в пермеабилизации внешней мембраны митохондрий 33
Взаимодействие Вах с белками аппарата фрагментации митохондри 36
Участие Вс1-2 и Bcl-xL в пермеабилизации внешней мембраны и фрагментации митохондрий 37
Фрагментация митохондриального ретикулума при изменении уровня кальция внутри клетки 38
Фрагментация митохондрии при окислительном стрессе 41
Митохондриально-направленные антиоксиданты 46
Материалы и методы 51
Реагенты 51
Объект исследования 51
Измерение продукции АФК методом проточной цитофлуорпметрни 52
Визуализация митохондрий и цитоскелета 52
Анализ клеточного цикла 53
Определение клеточной гибели 53
Фракционирование клеток 54
Метод «Western Blotting» 54
Результаты и обсуждение 55
1. Окислительный стресс в клетках HeLa 55
1.1. Пероксид водорода вызывает эндогенную продукцию АФК 55
1.2.АФК, образующиеся в клетках, имеют митохондриальную природу... 58
1.3. Изменения цитоскелета при окислительном стрессе 65
1.4. Клеточный цикл и гибель клеток при окислительном стрессе 66
2. Изучение роли АФК в фрагментации митохондрий 70
2.1. Окислительный стресс приводит к фрагментации митохондриального ретикулума 70
2.2. АФК необходимы для фрагментации митохондрий при окислительном стрессе 73
2.3. Фрагментацию митохондрий вызывают АФК митохондриального происхождения 74
2.4. Фрагментация митохондрий при окислительном стрессе не сопровождается транслокацией белка Drp-1 86
3. Изучение транслокации белка Вах при окислительном стрессе 88
3.1. Митохондриальные АФК вызывают транслокацию Вах при окислительном стрессе 88
3.2. Перераспределение Вах зависит от конформации переносчика адениновых нуклеотидов 93
3.3. Ингибиторы циклоспорин-зависимой митохондриальной поры не предотвращают транслокацию Вах 96
3.4. Транслокация Вах и фрагментация митохондрий могут происходить независимо друг от друга 100
4. Влияние белка Вс1-2 на морфологию митохондрий и локализацию ВАХ при окислительном стрессе 101
Заключение 104
Выводы 106
Благодарности 107
Список литературы
