Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1 Распределение митохондрий связано с их функциями в клетках... 9
1.2 Роль микротрубочек и актина в распределении митохондрий 11
1.2.1. Общие черты микротрубочек и актиновых микрофиламентов 11
1.2.2. Особенности системы микротрубочек 11
1.2.3. Особенности актинового цитоскелета 12
1.2.4. Транспорт митохондрий вдоль микротрубочек; роль кинезиновых и динеиновых моторов в этом процессе 13
1.2.5. Актин - зависимый транспорт митохондрий с участием моторных белков 15
1.2.6. Актин - зависимое движение митохондрий без участия моторных белков в дрожжах 16
1.2.7. Прикрепление митохондрий к микротрубочкам и актиновым микрофиламентам 18
1.2.7.1. Роль микротрубочек ассоциированных с ними белков (MAPs) 19
1.2.7.2. Прикрепление митохондрий к фибриллярному актину 20
1.3. Роль промежуточных филаментов в распределении митохондрий в клетках 22
1.3.1. Особенности промежуточных филаментов 22
1.3.2. Сборка виментиновых промежуточных филаментов в клетках 23
1.3.3, Взаимодействие промежуточных филаментов с митохондриями 25
1.3.4. Плектин - белок ассоциированный с промежуточными филаментами 26
1.4. Фибронектин - регулятор внутриклеточных процессов 28
1.5. Роль протеинкиназы С в регуляции перестроек цитоскелета 29
1.6. Регуляция распределения митохондрий ростовыми факторами 31
Глава 2. Материалы и методы 33
2.1. Культивирование клеток 33
2.2. Иммунофлюоресценция 34
2.2.1. Фиксация клеток 34
2.2.2. Иммунофлюоресцентное окрашивание 34
2.2.3. Антитела 35
2.2.4. Окрашивание актина 35
2.2.5. Окрашивание митохондрий 35
2.2.6. ДНК конструкции 35
2.2.7. Трансфекция клеток 36
2.2.8. Получение покровных стекол, покрытых фибронектином или его фрагментами 36
2.2.8.1. Получение фибронектина и его фрагментов 36
2.2.8.2. Пришивка фибронектина и его фрагментов к покровным стеклам 38
2.2.9. Посадка клеток на стекла, покрытые фибронектином или его фрагментами 39
2.3. Электрофорез и иммуноблотинг 39
2.4. Видеомикроскопия 40
2.5. Обработка данных 41
Глава 3. Результаты 43
3.1. Роль фибронектина, в регуляции формы и внутриклеточного распределения митохондрий в клетке 43
3.1.1. Прикрепление клеток к фибронектину 43
3.1.2. Влияние фибронектина на формирование стресс-фибрилл в клетках 45
3.1.3. Влияние фибронектина на форму митохондрий 46
3.1.4. Процесс удлинения и распределения митохондрий на периферии клетки зависит от взаимодействия их с микротрубочками 48
3.1.5. Локализация митохондрий на периферии клетки 49
3.2. Роль промежуточных филаментов в распределении митохондрий 50
3.2.1. Отсутствие промежуточных филаментов приводит к увеличению подвижности митохондрий в клетке 51
3.2.2. Роль промежуточных филаментов во взаимодействии митохондрий с актиновым цитоскелетом 59
3.3. Протеинкиназа С регулирует подвижность митохондрий 61
3.3.1. Подвижность митохондрий зависит от активности протеинкиназы С 61
3.3.2. Протеинкиназа С регулирует связь митохондрий с промежуточными филаментами 63
Глава 4. Обсуждение результатов 66
Выводы 72
Список литературы 73
