Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 8
1.1. Трансформация клеток и приобретение ими опухолевого фенотипа 8
1.1.1. Молекулярные аспекты иммортализации 1. 10
1.1.2. Контактное торможение 15
1.1.3. Рост в неприкрепленном состоянии, анойкис .19
1.2. Реверсия опухолеродных клеток к неопухолеродному фенотипу 23
1.2.1. Индуцированные реверсии 24
1.2.2. Спонтанные реверсии : 29
1.2.3. Спонтанные реверсии как источник дремлющих метастазов 30
ГЛАВА 2. Материалы и методы 35
2.1. Клеточные линии и культуры 35
2.1.1. Оценка роста клеток в сингенных животных 35
2.1.2. Оценка контактного торможения клеток по включению Н-тимидина 36
2.1.3. Оценка способности клеток к росту в неприкрепленном состоянии 37
2.2. Выделение суммарной РНК из клеток 37
2.3. ДНКазная обработка и анализ выделенной РНК. 38
2.4. Обратная транскрипция 38
2.5. Определение относительных концентраций полученной кДНК методом полуколичественного ПЦР: 39
2.6. Сравнение уровней экспрессии исследованных генов в различных клетках методом полуколичественного ПЦР 39
2.7. Математическая обработка полученных данных. 41
2.8. Проточная цитофлюорометрия 42
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 44
3.1. Сравнение ростовых характеристик злокачественных и ревертантных линий и клонов in vitro и in vivo 44
3.1.1. Оценка опухолеродности клеток по росту опухолей в сингенных животных.44
3.1.2. Оценка опухолеродности клеток по основным параметрам роста in vitro. 46
3.2. Сравнение уровней мРНК различных ростовых факторов и их рецепторов в злокачественных и ревертантных линиях и клонах in vitro и in vivo 50
3.2.1. Оценка уровней синтеза мРНК основных ростовых факторов клетками in vitroSO
3.2.2. Оценка уровней синтеза мРНК рецепторов ростовых факторов клетками in vitro и in vivo 55
3.2.3. Оценка уровней синтеза мРНК Гепатоцитарного Ростового Фактора (HGF) опухолевыми и псевдонормальными клетками in vitro и in vivo 61
3.3. Сравнение злокачественных и псевдонормальных клеток по содержанию белковых продуктов исследованных генов 70
3.3.1. Сравнение опухолевых и псевдонормальных клеток, находящихся в логарифмической фазе роста, по содержанию белковых продуктов HGF, HGFR и EGFR 71
3.3.2. Сравнение количества белкового продукта HGF в псевдонормальных клетках, находящихся в логарифмической фазе роста и в GO, обусловленной контактным торможением (конфлюэнтные клетки) 74
3.4. Реакция клеток на HGF, EGF и PDGF АА 79
3.4.1. Эффективность спасения клеток от апоптоза в присутствии HGF, EGF и PDGF
АА 79
3.4.2. Влияние антител против рецептора HGF на пролиферацию и аполтоз клеток80
Заключение 81
Выводы 85
Список цитированной литературы 86
