Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Митохондриальный геном растений 10
1.1.1. Особенности структурной организации митохондриального генома растений 10
1.1.2. Пластичность и динамичность митохондриального генома растений 12
1.2. Митохондриальные плазмиды растений 14
1.2.1. Видовой состав митохондриальных плазмид растений .15
1.2.2. Структура митохондриальных плазмид растений 16
1.2.3. Функции митохондриальных плазмид .19
1.2.4. Происхождение митохондриальных плазмид 1.3. Роль горизонтального переноса генов в пластичности митохондриального генома растений .21
1.4. Импорт нуклеиновых кислот в митохондрии 1.4.1. Механизм импорта тРНК в митохондрии 25
1.4.2. Поиск путей трансформации митохондриального генома различных организмов 31
1.4.3. Явление природной компетенции митохондрий к поглощению ДНК .37
1.4.4. Участие импортированной ДНК в митохондриальных генетических процессах 40
1.4.5. Изучение механизма импорта ДНК в митохондрии различных организмов 43
1.4.6. Изучение специфичности импорта ДНК в митохондрии 48
Выводы из литературного обзора .51
Постановка цели и задачи 52
2. Материалы и методы 54
2.1. Объект исследования .54
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение митохондрий из клубней картофеля 54
2.2.2. Оценка функционального состояния изолированных митохондрий .55
2.2.3. Обработка изолированных митохондрий трипсином 55
2.2.4. Обработка изолированных митохондрий протеиназой К 55
2.2.5. Получение митопластов 56
2.2.6. Амплификация ДНК с помощью полимеразной цепной реакции 56
2.2.7. Радиоактивно меченые олигонуклеотиды, использованные для импорта в митохондрии 58
2.2.8. Очистка олигонуклеотидов из полиакриламидного геля с помощью метода электроэлюции .58
2.2.9. Получение радиоактивно меченых субстратов для импорта ДНК в митохондрии 58
2.2.10. Получение флуоресцентно меченых субстратов ДНК для импорта в
митохондрии 59
2.2.11.Импорт ДНК в митохондрии 59
2.2.12. Импорт олигодезоксирибонуклеотидов (ОДН) в изолированные митохондрии картофеля 59
2.2.13. Фенольная экстракция нуклеиновых кислот из митохондрий 60
2.2.14. Экстракция тотальной митохондриальной ДНК с использованием метода термообработки митохондрий . 60
2.2.15. Анализ эффективности импорта с использованием ПЦР-РВ
2.2.16. Выделение плазмидной ДНК 62
2.2.17. Электрофоретический анализ ДНК .63
2.2.18. Электрофоретический анализ ОДН-связывающих белков 63
2.2.19. Статистическая обработка данных 64
2.2.20. Анализ ДНК-связывающих свойств белков .64
2.3. Материалы 64
3. Результаты и обсуждение .65
3.1. Анализ импорта ДНК в изолированные митохондрии 65
3.1.1. Разработка метода анализа импорта ДНК в изолированные митохондрии с помощью ПЦР-РВ 65
3.1.2. Субстраты ДНК для изучения специфичности импорта в митохондрии с помощью ПЦР-РВ 67
3.2. Характеристика особенностей импорта ДНК малой, средней и большой длины в изолированные митохондрии растений .68
3.2.1. Конкурентные взаимоотношения в импорте ДНК малой, средней и большой длины 71
3.2.2. Роль поверхностных белков митохондриальной мембраны в механизме импорта ДНК малой, средней и большой длины .75
3.2.3. Участие в механизме импорта ДНК митохондриального порина (VDAC) 79
3.2.4. Участие в механизме импорта ДНК белка внутренней мембраны митохондрий адениннуклеотидтранслоказы (АНТ) 90
3.2.5. Тестирование возможного участия в импорте ДНК переносчика адениновых нуклеотидов ADNT1 .95
3.2.6. Исследование транспорта ДНК с использованием метода аффинной модификации реакционноспособными олигодезоксирибонуклеотидами 98
3.2.7. Изучение влияния микросомальной фракции на импорт ДНК в реконструированной модельной системе 101
3.2.8. Выход импортированной ДНК из митохондрий картофеля (экспорт ДНК) .106
Заключение .109
Список литературы
