Введение
1 Обзор литературы «Использование первичных культур клеток для изучения инфекционных свойств вирусов» 14
1.1. Характеристика восприимчивости организма к вирусу гриппа. Методы оценки патогенности и инфекционности вирусов 14
1.2. Использование модельных животных в вирусологических экспериментах 29
1.3. Использование первичных и перевиваемых культур клеток для изучения инфекционности вирусов 32
1.4. Метод прогнозирования ИД50 вируса с использованием первичных культур клеток 35
1.5. Вирус гриппа, клетки-мишени и механизмы адсорбции и репродукции вируса гриппа в клетках-мишенях 39
1.5.1. Механизмы адсорбции и репродукции вируса гриппа в клетках-мишенях 43
1.5.2. Клетки-мишени для вируса гриппа 48
1.6. Факторы врожденного иммунитета к вирусу гриппа у мышей, крыс, других животных и человека 57
1.7. Использование первичных культур клеток для научных исследований 67
2 Материалы и методы 72
2.1. Вирус и определение его концентрации 72
2.2. Лабораторные животные 72
2.3. Получение первичных культур клеток легких и трахеи 73
2.4. Получение первичных клеточных культур с разным содержанием определенных типов легочных клеток 74
2.5. Оценка жизнеспособности клеток при длительном культивировании 76
2.6. Цитологическое исследование 76
2.7. Изучение кинетики инактивации вируса в дебрисе клеток. Определение константы скорости инактивации вируса 79
2.8. Определение кинетики репродукции вируса 79
2.9. Определение 50% инфицирующей дозы вируса для первичной суспензионной культуры клеток легких или трахеи 80
2.10. Определение продукции (урожайности) вируса для одной клетки 81
2.11. Определение 50% инфицирующей дозы для легких и трахеи у животных 82
2.12. Метод прогнозирования ИД5о 83
2.13. Проверка адекватности алгоритма прогнозирования 84
2.14. Получение бронхоальвеолярной лаважной жидкости (БАЛЖ), содержащей внеклеточные ингибирующие факторы секреторной эпителиальной выстилки (ИФСЭВ) крыс 84
2.15. Диализ и лиофилизация жидкости, содержащей ИФСЭВ 85
2.16. Изучение нейтрализующей активности жидкости, содержащей ИФСЭВ крыс, при инфицировании развивающихся куриных эмбрионов вирусом гриппа 86
2.17. Статистические методы 86
3 Результаты собственных исследований 89
3.1. Разработка методик определения параметров взаимодействия вируса гриппа с клетками трахеи и легких в первичной суспензионной культуре 89
3.1.1. Оптимизация условий культивирования первичной суспензионной культуры клеток, выделенной из легочной 89
3.1.2. Разработка методик определения параметров вирус-клеточного взаимодействия с учетом кинетических особенностей репродукции и инактивации вируса гриппа в первичной суспензионной культуре легочных клеток мышей и крыс 96
3.1.2.1 Определение вероятности продуктивной адсорбции вируса гриппа на восприимчивой клетке 98
3.1.2.2. Определение урожайности вируса гриппа в клетке (N) 102
3.1.2.3. Определение константы инактивации вируса (kj) и длительности стационарной фазы продукции вируса 106
3.2. Проверка возможности прогнозирования ИД50 вируса гриппа для хозяина 107
3.2.1. Определение ИД50 вируса гриппа для респираторных органов-мишеней у экспериментальных животных при аэрогенном заражении 107
3.2.2. Определение параметров вирус-клеточного взаимодействия для клеток легких и трахеи экспериментальных животных в первичной суспензионной клеточной культуре 111
3.2.3. Изучение вирус нейтрализующей активности внеклеточных ингибирующих факторов, входящих в состав секреторной эпителиальной выстилки, в легких у крыс 120
3.3. Прогнозирование восприимчивости животных in vivo на основании показателей инфекционности вируса гриппа в клетках легких и трахеи in vitro 124
Заключение 128
Выводы 136
Список использованной литературы
