Введение
Обзор литературы
1.1 Область нанотехнологии .
1.2 Характеристика НЧ Si и области их использования
1.3 Обоснование выбора in vitro модели
1.4 Факторы, влияющие на цитотоксичность и биосовместимость НЧ in vitro
1.4.1 Агрегация НЧ в растворе .
1.4.2 Модификация поверхности НЧ
1.4.3 Взаимодействие НЧ с компонентами биологических сред .
1.5 Интернализация НЧ клетками и влияние НЧ на клеточные
органеллы
Глава 2. Материалы и методы исследований
2.1 Использованное оборудование, материалы и реактивы
2.1.2 Химические реактивы, культуральные среды и пластик .
2.2 Клеточные культуры
2.2.1 Приготовление сред для культивирования клеток
2.2.2 Выделение мононуклеаров периферической крови человека
Культивирование мононуклеаров периферической крови человека
Культивирование МСК 40
Культивирование фетальных фибробластов 40
Пассирование МСК и фетальных фибробластов НЧ 40
Получение НЧ Si 41
2.3.2 Синтез НЧ Si/B 41
2.3.3 Синтез НЧ Si/Pd 42
2.3.4 Синтез НЧ Si/Au 42
2.3.5 Синтез НЧ Si/Ag 43
2.3.6 Структура исследования (схема эксперимента) 43
2.4 Исследование клеточной жизнеспособности, состояния внутриклеточных органелл и активации МНК с применением флуоресцентных зондов и моноклональных антител
2.4.1 Проточная цитометрия 44
2.4.2 Оценка жизнеспособности клеток 45
2.4.3 Характеристика трансмембранного потенциала митохондрий 45
2.4.4 Оценка состояния лизосомального компартмента 46
2.4.5 Анализ продукции активных форм кислорода 46
2.4.6 Анализ активации лимфоцитов 46
2.4.7 Анализ продукции цитокинов 46
2.4.8 Оценка пролиферативной активности фибробластов 47
2.4.9 Оценка жесткости клеточной мембраны МСК 47
2.4.10 Исследование структуры актинового цитоскелета МСК 48
2.4.11 Оценка поглощения/адсорбции НЧ клетками 49
2.5 Статистическая обработка данных 49
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение
3.1 Влияние НЧ на иммунокомпетентные клетки человека 50
3.1.2 Влияние НЧ на внутриклеточные компартменты МНК и продукцию АФК 55
3.1.3 Активация лимфоцитов и продукция интерлейкинов 63
3.2 Влияние НЧ на МСК человека 68
3.2.1 Жизнеспособность, состояние органелл и содержание АФК в
МСК при инкубации с НЧ з
3.2.2 Влияние НЧ Si и Si/B на пролиферацию эмбриональных фибробластов человека 82
3.2.3 Жесткость цитоплазматической мембраны и цитоскелет МСК 4 Заключение 97
5 Выводы 100
6 Список литературы 101
