Введение
2. Введение
2.1. Актуальность темы исследования 5
2.2. Степень разработанности темы 6
2.3. Цель и задачи работы 7
2.4. Научная новизна работы 7
2.5. Апробация результатов 8
3. Обзор литературы 9
3.1. Клеточный каннибализм (КК) 9
3.1.1. Отличия клеточного каннибализма от фагоцитоза 10
3.2. Энтоз 13
3.2.1. Механизм внедрения клетки в клетку при энтозе 13
3.2.2. Судьба внедрившейся клетки 22
3.3. Эмпериполез 23
3.3.1. Механизм внедрения клетки в клетку при эмпериполезе 29
3.4. Биологическая роль клеточного каннибализма 32
4. Материалы и методы 34
4.1. Материалы 34
4.1.1. Оборудование 34
4.1.2. Расходные материалы 34
4.1.3. Биологический материал 35
4.1.4. Реагенты 35
4.2. Методы исследования 37
4.2.1. Культивирование клеток 37
4.2.2. Морфологический анализ клеток 37
4.2.3. Химические воздействия на клетки
4.2.3.1. Постановка эксперимента с цитохалазином В, нарушающим организацию актиновых филаментов 38
4.2.3.2. Постановка эксперимента с нокодазолом, вызывающим деполимеризацию микротрубочек 38
4.2.3.3. Постановка эксперимента с брефелдином А, нарушающим организацию аппарата Гольджи 38
4.2.4. Прижизненные наблюдения за клетками з
4.2.5. Мечение клеток бромдезоксиуридином 40
4.2.6. Окрашивание фиксированных клеток 4.2.6.1. Цитохимическое окрашивание 40
4.2.6.2. Иммуноцитохимическое окрашивание 4.2.7. Совместное культивирование клеток разных линий 41
4.2.8. Сканирующая электронная микроскопия (СЭМ) 42
4.2.9. Трансмиссионная электронная микроскопия (ТЭМ) 4.2.10. Корреляционная микроскопия 43
4.2.11. Обработка и анализ результатов 44
5. Результаты 45
5.1. Картины “клетка-в-клетке” в исследуемых культурах 45
5.2. Доказательство локализации внедрившейся клетки внутри энтозной клетки 47
5.3. Частота встречаемости картин “клетка-в-клетке” при длительном культивировании в исследуемых культурах 48
5.4. Процесс внедрения одной клетки внутрь другой 50
5.5. Стадии энтоза в структурах “клетка-в-клетке” 5.5.1. Форма и размер внутренней клетки 52
5.5.2. Наличие пространства между плазматической мембраной внутренней клетки и мембраной энтозной вакуоли 53
5.5.3. Состояние ядра и цитоплазмы внутренней клетки 5.6. Межклеточное взаимодействие 54
5.7. Актиновый цитоскелет клеток и его участие в процессе энтоза 56
5.8. Система микротрубочек и её вклад в процесс энтоза 65
5.9. Центросома 69
5.10. Мембранные органеллы клеток 71
5.10.1. Аппарат Гольджи 71
5.10.2. Кислый везикулярный компартмент 72
5.10.3. Аутофагосомы 73
5.10.4. Митохондрии 5.11. Роль аппарата Гольджи при энтозе 77
5.12. Влияние ДМСО на морфологию клеток, а также на уровень митозов, апоптозов и энтозов в культуре клеток А431 82
5.13. Судьба внедрившейся клетки при энтозе 84
5.14. Цитохром с 86
5.15. Каспаза-3 87
5.16. Активные формы кислорода 88
5.17. Выявление гетеротипического энтоза при совместном культивировании разных клеточных линий 5.17.1. Влияние бромдезоксиуридина на клетки 90
5.17.2. Оценка пролиферативного пула при продолжительном мечении клеток бромдезоксиуридином 91
5.17.3. Совместное культивирование меченой и немеченой популяций клеток линии А431 92
5.17.4. Совместное культивирование клеток линий НаСаТ и А431 95
5.17.5. Совместное культивирование клеток линий НаСаТ HMCF7 102
5.17.6. Совместное культивирование опухолевых клеток линий MCF7 и А431 108
5.18. Доказательство локализации внедрившейся клетки внутри энтозной клетки при гетеротипическом энтозе 116
5.19. Исследование способа деградации внедрившейся клетки при гетеротипическом энтозе 118
6. Обсуждение результатов 121
7. Заключение 138
8. Выводы 143
9. Список сокращений 144
10. Список литературы
