Введение
I. Введение 6
II. Обзор литературы 12
II.1. Синдром Ретта 12
II. 1.1. Клиническая характеристика 12
II. 1.2. Диагностические критерии 18
II. 1.3. Классическая форма и атипичные случаи синдрома Ретта 20
II.2 Генетические особенности синдрома Ретта 21
II.2.1. Цитогенетические и молекулярно-цитогеиетические исследования 21
II.2.2. Картирование гена, ответственного за синдром Ретта 24
II.2.3. Ген МЕСР2 (характеристика белка МеСР2 и гена МЕСР2) 27
II.2.4. Мутации в гене МЕСР2 30
II.З. Инактивация хромосомы X 39
II.3.1. Феномен инактивации хромосомы X 39
II.3.2. Причины возникновения инактивации хромосомы X и её значение в патогенезе наследственных болезней 44
II.3.3. Роль инактивации хромосомы X при синдроме Ретта 50
11.4. Корреляции особенностей генотипа и фенотипа при синдроме Ретта 54
II.4.1. Корреляция фенотипа с типом и положением мутаций в гене МЕСР2 54
II.4.2. Корреляция фенотипа с особенностями инактивации хромосомы X 57
11.5. Заключение 59
III. Объект и методы исследования 63
III.1. Объект исследования 63
ІІІ.2. Методы исследования 64
ІІІ.2.1. Выделение ДНК из клеток лимфоцитов периферической крови 64
III.2.1.1. Определение концентрации ДНК 65
III.2.2. Анализ инактивации хромосомы X 65
III.2.3. Определение мутаций гена МЕСР2 методом секвенирования ДНК 67
ІІІ.2.4. Энзиматический тест на определение рекуррентных мутаций гена МЕСР2 68
III.2.5. Цитогенетический анализ 70
III.2.5.1. Культивирование и фиксация лимфоцитов периферической крови, приготовление препаратов метафазных клеток 70
ІІІ.2.5.2. G-окрашивание хромосом 71
III.2.5.3. С-окрашивание хромосом 71
III.2.6. Молекулярно-цитогенетические исследования методом флюоресцентной гибридизации in situ (FISH) 72
III.2.7. Оценка клинических признаков при синдроме Ретта 73
III.2.8. Статистическая обработка данных 77
IV Результаты и обсуждение 78
IV. 1. Цитогенстичсские и молекулярно-цитогенетические исследования 78
IV. 1.1. Цитогеиетические исследования детей с синдромом Ретта и их матерей 78
IV. 1.2. Молекулярно-цитогенетические исследования детей с синдромом Ретта и их матерей 79
IV.2. Молекулярно-генстические исследования мутаций гена МЕСР2 у детей с синдромом Ретта 82
IV.2.1. Исследования мутаций гена МЕСР2 у детей с синдромом Ретта методом секвенирования ДНК 82
IV.2.2. Исследование рекуррентных мутаций гена МЕСР2 у детей с RTT при помощи энзиматического теста 97
IV.3. Исследование особенностей инактивации хромосомы X у детей с синдромом Ретта и их матерей 102
IV.4. Исследование зависимости фенотипических характеристик детей с синдромом Ретта от особенности инактивации хромосомы X и мутаций гена МЕСР2 124
IV.4.1. Анализ зависимости фенотипических характеристик от инактивации хромосомы X и мутаций гена МЕСР2 у детей с синдромом Рстта, исследованных на наличие мутаций в гене МЕСР2 132
IV.4.2. Анализ зависимости фенотипических характеристик от инактивации хромосомы X у детей с синдромом Ретта, неисследованных на наличие мутаций в гене МЕСР2 138
IV.4.3. Определение зависимости фенотипических характеристик от эпигенетических и генетических особенностей детей с синдромом Ретта 140
IV.4.4. Необычный случай монозиготных близнецов с синдромом Ретта, конкордатных по МЕСР2 мутации 145
IV.4.5. Необычный случай классической формы синдрома Ретта у мальчика с мозаичной формой синдрома Клайнфельтера 148
IV.5. Схема последовательных этапов диагностики синдрома Рстта, разработанная на базе полученных данных 151
V. Заключение 155
VI. Выводы 158
VII. Список литературы 160
VIII. Приложение 179
