Введение
ГЛАВА 1. Оксид азота: сигнальный мессенджер и цитотоксический агент (обзор литературы) 10
1.1. История открытия физиологической роли оксида азота 10
1.2. Физико-химические свойства NO, лежащие в основе его эволюционно закрепленных биологических функций
1.2.1. Высокая диффузионная способность 13
1.2.2. Высокая реакционная способность 14
1.2.3. Цитотоксичность
1.3. Образование оксида азота в организме 15
1.4. Сигнальный каскад оксида азота
1.4.1. Растворимая гуанилатциклаза и цГМФ 17
1.4.2. NO-зависимый механизм релаксации кровеносных сосудов 17
1.5. Цитотоксические свойства оксида азота. Пероксинитрит 20
1.5.1. Механизмы развития пероксинитритзависимой цитотоксичности 21
1.5.2. Биологические мишени пероксинитрита 23
1.5.3. Оксид азота в системе неспецифического иммунитета 25
1.6. Роль гемопротеидов в осуществлении сигнальной функции NO.. 26
1.6.1. Гемоглобин как ловушка оксида азота 26
1.6.2. Пул эритроцитов как дренажная система 27
1.6.3. Представления об альтернативных гемоглобинзависимых механизмах NO-сигнализации 29
1.7. Доноры оксида азота как фармакологические эффекторы 31
1.7.1. Современные клинические средства c NO-донорной активностью 32
1.7.2. Новые классы доноров оксида азота 33
ГЛАВА 2. Материалы и методы 41
2.1. Химические реактивы и соединения 41
2.2. Приборы и оборудование 41
2.3. Доноры оксида азота 41
2.4. Получение эритроцитарной массы 43
2.5. Исследование кинетики гемолиза эритроцитов 43
2.6. Определение общего гемоглобина 44
2.7. Определение внутриэритроцитарного метгемоглобина 44
2.8. Анализ продуктов ПОЛ 45
ГЛАВА 3. Гемолитическая активность биядерных тетранитрозильных комплексов железа 46
3.1. Феноменология и количественное описание кинетики гемолиза 46
3.2. Кинетические закономерности гемолиза эритроцитов под действием Б-ТНКЖ 48
3.3. Ослабление гемолитической активности раствора Б-ТНКЖ 52
3.4. Сравнительный анализ гемолитической активности Б-ТНКЖ 54
3.5. Зависимость гемолитического эффекта Б-ТНКЖ от гематокрита суспензии 56
3.6. Зависимость скорости гемолиза от температуры 57
3.7. Результаты ТБК-теста 59
3.8. Гемолитическая активность Б-ТНКЖ: предварительные итоги 61
ГЛАВА 4. Пероксинитрит как химический индуктор гемолиза эритроцитов 63
4.1. Эритроциты – Б-ТНКЖ: модель взаимодействия 63
4.2. Кинетические закономерности образования внутриэритроцитарного метгемоглобина под действием Б-ТНКЖ 64
4.3. Взаимосвязь между гемолитической активностью и NO-донирующей способностью Б-ТНКЖ 66
4.4. Биохимическая трансформация оксида азота в эритроците 67
4.5 Кинетическое моделирование генерации пероксинитрита в условиях гемолитического эксперимента 69
4.6. Гемолитическое действие синтетического пероксинитрита 76
4.7. Сульфгидрильные мишени пероксинитрита в эритроците 77
ГЛАВА 5. NO-донирующая способность биядерных тетранитрозильных комплексов железа в присутствии эритроцитов 79
5.1. Влияние клеточной среды на скорость разложения Б-ТНКЖ 80
5.2. NO-донирующая способность ПЕН 82
5.3.Эффект «плавающей константы» 84
5.4. Оценка липофильности лигандов 90
Заключение 96
Выводы 97
Список литературы
