Введение
Глава I. Обзор литературы 11
1. Биологическая характеристика и лизоцимная активность различных видов стафилококков 11
2. Основные биологические свойства бактериального лизоцима, отличительные особенности бактериального лизоцима по сравнению с яичным, механизм его антимикробного действия и методы выделения 17
3^ Биологическая роль лизоцимного фактора у микроорганизмов и практическое использование лизоцима в медицине 21
4. Лизоцимная активность грамположительных микроорганизмов 27
5. Факторы межмикробного взаимодействия
стафилококков в бактериальном биоценозе 32
6. Генетические механизмы контроля факторов межмикробного взаимодействия 34
7. Клонирование генов литических ферментов грамположительных бактерий 36
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 48
Глава П. Материалы и методы 51
1. Питательные среды и штаммы бактерий 51
2. Микробиологические методы 56
2.1. Качественный метод определения лизоцимной активности у клинических изолятов S. aureus, Lactobacillus fermentum, В. subtilis 56
2.2. Качественный метод определения лизостафиновой активности Staphylococcus simulans 58
2.3. Количественный метод определения лизоцимнои активности S. aureus, Lactobacillus fermentum, В.
subtilis 59
2.4. Определение антагонистической активности лактобацилл против условно-патогенных бактерий 60
3. Молекулярно-генетические методы 61
4. Методы статистического анализа 69
Глава III. Результаты собственных исследований 71
1. Коллекция клинических штаммов S. aureus и их общая характеристика .-. 71
2. Определение спектров лизоцимнои активности Staphylococcus aureus 118 и лизостафиновой активности Staphylococcus simulans RN3239 77
3. Выбор векторной системы и реципиента для клонирования гена лизоцима S. aureus 118 и гена лизостафина S. simulans RN3239 79
4. Проверка штаммов Bacillus subtilis AJ73 на лизоцимную и лизостафиновую активность, на устойчивость к лизоциму S. aureus 118 и лизостафину S. simulans RN3239 80
5. Клонирование гена, кодирующего лизоцим S. aureus 118
в клетках В. subtilis AJ73 82
6. Определение наличия вставки фрагмента чужеродной хромосомной ДНК S. aureus 118 в рекомбинантных плазмидах pLFi4Lyz+b pLFi4Lyz+2, pLFi4Lyz+3 методом ПЦР 89
7. Клонирование гена лизостафина S. simulans RN3239 в клетках Bacillus subtilis 94
8. Передача и наследование рекомбинантной плазмиды pLFKLyz+з в клетках В. subtilis, Е. coli, L. fermentum 97
9. Изучение антагонистической активности рекомбинантного штамма L. fermentum ЛВ 290 в отношении стафилококков 109
Ю.Выявление гена lyt А, контролирующего лизоцимную активность у клинических изолятов S. aureus с помощью
Пцр 111
Обсуждение результатов и заключение -. 115
Выводы 121
Список литературы 122
