Введение
II. Обзор литературы
Введение 10
Спектральные свойства собственных и присоединенных флуорофоров белка 10
Н.2.1. Собственные флуорофоры белка 11
Н.2.2. Присоединенные красители: продан и акрилодан 11
П.2.3. Электронная структура полосы поглощения индольного флуорофора 12
Н.2.4. Электронная структура полосы поглощения продана 13
П.З. Флуоресценция и факторы, влияющие на ее характеристики 15
П.3.1. Спектры флуоресценции 17
П.3.2. Природа флуоресцентного состояния триптофана 17
Н.З.З. Природа флуоресцентного состояния продана и его производных 18
Н.3.4. Влияние межмолекулярных взаимодействий на электронно-колебательные переходы 20
Н.3.5. Влияние универсальных взаимодействий на сдвиг и форму спектров флуоресценции 20
Н.3.6. Влияние специфических взаимодействий на спектры триптофановой флуоресценции 22
11.4. Триптофановая флуоресценция белка 24
Н.4.1. Физические характеристики окружения флуорофоров в белках 24
Н.4.2. Квантовый выход и тушение флуоресценции внутренними
группами белка 26
Н.4.3. Метод избирательного тушения флуоресценции 27
Н.4.4. Модель дискретных состояний остатков триптофана в белках 29
11.5. Форма электронно-колебательного спектра многоатомных органических флуорофоров 31 11
5.1. Теоретическое описание формы электронно-колебательных спектров 31
11.5.2. Описание формы спектров флуоресценции математической функцией 34
11.6, Компонентный анализ спектров флуоресценции белков 35
II.6.1. Разложение спектров флуоресценции по степени доступности внешнему тушителю 35
И.6.2. Разложение спектров флуоресценции по параметрам затухания флуоресценции 36
11.6.3. Определение спектров индивидуальных флуорофоров с использованием направленных мутаций 36
П.6.4. Расчетное разложение составных спектров методом наименьших квадратов 37
11.7, Исследование структурных изменений и переходов в белках методом флуоресценции 38
П.7.1, Параметры флуоресценции как мера завершенности перехода 39
П.7.2, Обнаружение промежуточных состояний 39
11,7.3, Использование флуоресцентных методов в изучении структурных переходов белков 40
П.8, Заключение и постановка задачи 41
III. Материалы и методы
III. 1. Препараты 44
Ш.2. Спектральные измерения 45
Ш.З. Обработка и анализ спектров флуоресценции 46
IV. Результаты
IV. 1. Аналитическое описание формы спектров флуоресценции 49
IV.2. Взаимозависимость параметров формы спектров флуоресценции флуорофоров. Определение формы однородного спектра 50
IV.2.1. Влияние растворителя на форму и положение спектров флуоресценции СЗ-замещенных индола 50
IV.2.2. Однородные спектры триптофановой флуоресценции в белках 53
IV.2.3. Влияние растворителя на форму и положение спектров флуоресценции продана и акрилодана 54
IV.2.4. Влияние растворителя на форму и положение спектров флуоресценции З-амино-Ы-метилфталимида, 1- и 2 ацетилантрацена 57
IV.3. Тестирование разложения спектров флуоресценции на элементаные лог-нормальные компоненты 61
IV.4. Исследование структурных переходов в мелиттине в процессе его олигомеризации 65
IV.4.1. Переходы в мелиттине под действием ионной силы 67
IV.4.2. Влияние концентрации мелиттина на процесс олигомеризации. Стехиометрия олигомеризации 69
IV.4.3. Индуцируемые рН переходы в тетрамере мелиттина 73
IV.4.4. Тепловые переходы в тетрамере мелиттина 75
IV.5. Денатурация р-лактоглобулина мочевиной 78
IV.6. Анализ лог-нормальных компонент спектров флуоресценции связанных с белками продана и акрилодана 80
IV.6.1. Взаимодействие продана с бычьим сывороточным альбумином 81
IV.6.2. Флуоресценция акрилодана в конъюгате с субфрагментом S1 миозина 83
IV.6.3. Флуоресценция акрилодана в конъюгатах с актином 88
V. Обсуждение результатов 90
VI. Выводы 95
VII. Список литературы 96
