Введение
1.Обзор литературы 9
1.1.Выделение Na+,K+ATФазы 9
1.2.Цикл Альберса-Поста 10
1.3.Неканонические режимы работы белка 11
1.4. Структура Na+,K+-ATФазы 13
1.5.Различие структуры Na+,K+-АТФазы в двух основных конформациях 15
1.6.Ингибиторы Na+,K+-АТФазы .17
1.7.Сайты связывания ионов в белке 17
1.7.1.Гипотетическая последовательность связывания Na+ 24
1.8. Определение констант связывания K+ и Na+ в цитоплазматических сайтах связывания Na+,K+-ATФазы 27
1.9.Специфичность Na+,K+-ATФазы к переносимым ионам .29
1.10. Влияние многовалентных ионов 31
1.11.Электрогенность Na+,K+-ATФазы. Диэлектрические коэффициенты 32
1.12.Модель электрогенного транспорта ионов Na+,K+-АТФазой .34
1.13.Исследования на клетках. Нестационарный транспорт .36 1.14.Исследования на плоских бислойных мембранах. Метод адмиттанса 38
1.15.Влияние рН на активность Na+,K+ATФазы 43
1.16.Постановка задачи 46
2. Материалы и методы .48
2.1.Материалы. 48
2.2.Методы .50
2.2.1. Методы формирования БЛМ и регистрации токов Na+,K+-АТФазы 51
3 2.2.2.Метод компенсации внутримембранного поля с помощью второй гармоники емкостного тока 56
3.Результаты и их обсуждение. 57
3.1.Опыты с caged-ATP 57
3.2.Опыты с caged-H+ 63
3.2.1.Опыты на БЛМ без адсорбированных мембранных фрагментов .63
3.2.2.Опыты с Na+,K+-ATФазой 70
3.2.2.1.Определение констант связывания Na+ и K+ в цитоплазматических сайтах Na+,K+-ATФазы 79
3.2.2.2. Зависимость связывания Na+ в цитоплазматических сайтах от концентрации Mg2+ 83
3.3.Заключение 85
4.Выводы 86
5.Список используемой литературы
