Введение
II. Обзор литературы 10
II.I. Общее строение вириона вируса гриппа и функции вирусных белков 10
II.2. Гемагглютинин вирусов гриппа А, его структура и функции 18
II.2.1. Рецептор связывающий сайт 20
II.2.2. Пептид слияния 22
II.2.3. Участок нарезания гемагглютинина (протеолитисеский сайт) 25
II.2.4. Антигенная структура гемагглютинина 27
II.3. Изменения гемагглютинина в процессе адаптации вирусов гриппа к новому хозяину (на примере адаптации к легким мышей)
III. Материалы и методы 44
III.1. Вирусы 44
III.2. Клетки 45
III.3. Моноклональное антитело С179 46
III.4. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) 46
ІII.5. Нейтрализация инфекционности вирусов в культуре клеток 46
III.6. Пассирование вируса в легких мышей 47
III.7. Титрование инфекционности вирусов на куриных эмбрионах 48
III.8. Титрование инфекционности вирусов на мышах 48
III.9. Получение радиоактивно меченых вирусспецифических белков для реакции радиоиммунопреципитации
III.10. Получение вирусспецифических белков, радиоактивно меченых в пульс - чейз условиях.
III.11. Радиоактивное мечение вирусспецифических белков в присутствии туникамицина
III.12. Реакция радиоиммунопреципитации (РИП) 50
III. 13. Электрофорез белков в полиакриламидном геле 51
III.14. Определение нуклеотидной последовательности гена НА 51
III.15. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностейгенов НА
III.16. Сравнение аминокислотных последовательностей НА различных штаммов и анализ локализации замен на 3-мерной структуре НА подтипа
III. 17. Пассивная иммунизация мышей МКА С179 и экспериментальная инфекция
IV. Результаты 58
IV. 1. Взаимодействие МКА С179 с вирусами гриппа подтипа Н5 и Н6 58
IV.1.1. Нейтрализация вирусов подтипов Н5 и Н6 моноклональным антителом С179 в культуре клеток
IV.1.2. Распознавание НА подтипов Н5 и Нб МКА С179 в реакции радиоиммунопреципитации (РИЛ) 59
IV.1.3. Влияние созревания НА подтипа Н6 на его распознавание МКА С179вРИП IV. 1.4. Взаимодействие МКА С179 с НА подтипа Н6, меченным в 62
присутствии туникамицина, в РИЛ
IV.1.5. Сравнение аминокислотных последовательностей участков, распознаваемых МКА С179, в НА подтипов HI, Н2, Н5
IV. 1.6. Потенциальные сайты гликозилирования в НА подтипов HI, Н2, Н5 и Нб
IV.2. Адаптация птичьего штамма вируса гриппа A (H5N2) к легким мышей.
IV.2.1. Репродукция вируса в легких мышей в ходе адаптации. 69
Вирулентность адаптированного варианта Mal.dk/PA/84-MA
IV.2.2. Антигенные свойства НА вирусов Mal.dk/PA/84 и Mal.dk/PA/84-MA. Резистентность к а- и р-ингибиторам гемагглютинации
IV.2.3. Анализ первичной структуры НА вирусов Mal.dk/PA/84 и Mal.dk/PA/84-MA IV.2.4. Реакции in vitro МКА С179 с адаптированными к мышам вариантами птичьих штаммов с подтипами НА Н5 и Н2
IV.3. Эксперименты in vivo по профилактике и лечению летальной 79
