Введение
Обзор литературны ! 11
Часть 1. Характеристика вирусов гриппа
1.1. История этиологии и эпидемиологии гриппа 11
1.2. Классификация І 16
1.3. Организация генома и функции вирусных белков 1 16і
1.3 Л. Белки полимеразного комплекса (РВ2, РВ1 и РА) , 18
1.3.2. Гем агглютинин 18і
1.3.3. Нуклеопротеин 1 20і
1.3.4. Нейраминидаза 1 20I
1.3.5. Матриксный (Ml) и трансмембранный белок (М2) 21
1.3.6. Неструктурные белки (NS1 и NS2) 24
1.4. Клинические признаки и патогенез 24
1.5. Мировая система мониторинга гриппа | 29
Часть 2. Противовирусные лекарственные средства 31
1.6. Амантидин и римантадин как блокаторы белка М2 31
1.7. Занамивир и озельтамивир как ингибиторы нейраминидазы | 34
1.8. Арбидол j 37
1.9. Контроль качества противовирусных лекарственных средств и стандартизация метода ГЩР 40
1.10. Резистентность к лекарственным средствам - основная проблема ,современной химиотерапии гриппа
II Материалы и методы 59
2.1. Материалы 1 59і
2.1.1. Штаммы вирусов гриппа А і 5 9
2.1.2. Химические реагенты 61
2.1.3. Реагенты и наборы для молекулярной биологии | 61!
2.1.4. Оборудование J 62і
2.1.5. Расходные материалы и лабораторная посуда 63
2.2. Методы 64
2.2.1. Выделение РНК вирусов гриппа ! 64
2.2.2. Реакция обратной транскрипции ! 64
2.2.3. Полимеразная цепная реакция і 64
2.2.4. Электрофорез ДНК в агарозном геле ] 65
2.2.5. Выделение фрагментов ДНК из геля2.2.6. Секвенирование ДНК. I 66
2.2.7. Выравнивание последовательностей и филогенетический анализ
III Результаты | 67
3.1.Анализ первичной структуры генов М, НА и NA вируса гриппа A(HlNl)nA(H3N2).
3.2. Разработка и стандартизация диагностической системы на основе ОТ- ПЦР и сиквенса для амплификации и определения первичной структуры генов М2, НА и NA
3.3.Секвенирование генов М2, НА и NA и идентификация мутаций, ответственных за устойчивость к лекарственным средствам.
3.3.1. Анализ эпидемических штаммов вируса гриппа A(H1N1) и A(H3N2).
3.3.2. Анализ клинических образцов вирусов гриппа A(H1N1) и A(H3N2) ; 82
3.4.Анализ аминокислотной последовательности белков М2, NA и НА и і
выявление потенциальных маркеров устойчивости к противовирусным средствам.
3.5.Филогенетический анализ эпидемических штаммов. | 93
IV Обсуждение полученных результатов і 100
V Выводы
VI приложения
VII Библиографический список
