Введение
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 10
2.1. Биоконверсия 9( 11 )-дегидро-3-кетостероидов 10
2.2. Микробиологическое 1(2)-дегидрирование 3-кетостероидов 13
2.2.1. Распространенность 3-кетостероид-1(2)-дегидрогеназной (3-КСД) 13 активности среди микроорганизмов
2.2.2. Свойства 3-КСД 14
2.2.3. Сходство строения и механизма действия 3-КСД и других дегидрогеназ 18
2.2.4. Механизм 1 (2)-дегидрирования 3-кетостероидов на примере 3-КСД 19 Nocardia corallina
2.2.5. Субстратная специфичность 3-КСД 20
2.2.6. Локализация 3-КСД 22
2.2.7. Связь 3-КСД с другими ферментными системами клетки 22
2.3. Реклассификация штаммов рода Arthrobacier 25
2.3.1. Современная систематика микроорганизмов 25
2.3.2. Признаки, используемые для классификации и идентификации актиномицетов 26
2.3.3 Переописание штаммов, ранее отнесенных к роду Arthrobacier 28
2.4 Биоконверсия труднорастворимых субстратов 30
2.4.1. Конверсия стероидных субстратов в микрокристаллической форме 30
2.4.2. Использование специальных реакторов для биоконверсии 30
2.4.3. Использование органических растворителей 31
2.4.4. Использование полимеров 33
2.4.5. Использование циклодекстринов и их производных 33
2.5. Культивирование микроорганизмов 39
2.5.1 Режим с периодической подпиткой 39
2.5.2. Варианты стратегии управлением режима с подпиткой 40
3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 42
3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 42
3.1.1. Реактивы 42
3.1.2. Микроорганизмы и методы их культивирования 42
3.1.2.1. Штаммы, использованные в работе 42
3.1.2.2 Среды для выращивания микроорганизмов 42
3.1.2.3. Условия культивирования "Arthrobacter globiformis 193" 43
3.1.2.4. Фракционирование (получение ЦПМ) 44
3.1.2.5. Трансформация стероидных субстратов 44
3.1.3. Микроскопия 45
3.1.3.1. Электронная микроскопия 45
3.1.3.2. Световая микроскопия 45
3.1.4. Аналитические методы 46
3.1.4.1. Анализ продуктов трансформации 46
3.1.4.2. Масс-спектрометрический анализ 48
3.1.4.3. ЯМР-спектрометрия 48
3.1.4.4. Определение концентрации белка 48
3.1.4.5. Определение растворимости стероидов 48
3.1.5. Таксономические методы 49
3.1.5.1. Определение чувствительности к антибактериальным препаратам 49
3.1.5.2. Определение способности утилизировать сахаро-спирты в качестве динственного источника углерода 49
3.1.5.3. Определение гидролазной активности 49
3.1.6. Определение основных хемотаксономических признаков 50
3.1.6.1. Очищенные препараты клеточных стенок 50
3.1.6.2. Определение изомера диаминопимелиновой кислоты 50
3.1.6.3. Определение аминокислотного состава полученных препаратов пептидогликанов 50
3.1.6.4. Полуколичественное определение менахинонов 51
3.1.6.5. Состав жирных кислот 51
3.1.7. Определение последовательности гена 16S рРНК 51
3.1.8. Филогенетический анализ 51
3.2 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 53
3.2.1. Ре-идентификация штамма "Arthrobacter globiformis 193" 53
3.2.2. Биоконверсия ацетилированных 9(11 )-дегидро-3-кетостероидов 59
3.2.2.1. Конверсия прегна-4,9(11 )-диен-17сс,21-диол-3,20-диона 59
3.2.2.2. Конверсия 21 -ацетата прегна-4,9( 11 )-диен-17сс,21 -диол-3,20-диона 65
3.2.2.3. Конверсия 17а,21-диацетатапрегна-4,9(11)-диен-17ос,21-диол-3,20-диона 77
3.2.2.4. Конверсия 21-ацетокси-прегна-4,9(11),16(17)-триен-3,20-диона 96
3.2.3. Выращивание уплотнённой культуры N. simplex ВКМ Ас-2033Д 114
4. ВЫВОДЫ 129
5. СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 130
